人用疫苗雜質(zhì)控制

2024.8.09

　　新版中國藥典發(fā)布3309人用疫苗雜質(zhì)控制技術(shù)指導(dǎo)原則，以20版藥典三部《人用疫苗總論》為基礎(chǔ)，基于我國已上市疫苗產(chǎn)品的雜質(zhì)控制的實(shí)際經(jīng)驗(yàn)，參考ICH關(guān)于風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估和全生命周期管理理念，從疫苗雜質(zhì)來源，疫苗雜質(zhì)控制的原則及策略，包括風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估、全過程控制、全生命周期管理、不同類型疫苗雜質(zhì)的控制要點(diǎn)，以及變更事項(xiàng)對(duì)疫苗雜質(zhì)控制等各方面保證疫苗產(chǎn)品質(zhì)量。賽默飛色譜與質(zhì)譜針對(duì)傳統(tǒng)疫苗、重組疫苗和核酸疫苗提供全方位的研發(fā)及工藝質(zhì)控。

　　工藝相關(guān)雜質(zhì)

　　工藝相關(guān)雜質(zhì)主要來源于生產(chǎn)用物料，包括生產(chǎn)過程中使用的起始物料，生產(chǎn)過程中引入的原材料，制劑所用輔料以及直接接觸藥品的內(nèi)包裝材料的浸出物等。

　　1. 宿主細(xì)胞蛋白殘留物

　　隨著高分辨質(zhì)譜技術(shù)性能的不斷提升，已具有高靈敏度和寬的定量動(dòng)態(tài)范圍，以及蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)的飛速發(fā)展，可實(shí)現(xiàn)對(duì)未知蛋白質(zhì)的高通量定性和定量。

　　采用賽默飛EASY nLC 1200與Orbitrap系列高分辨質(zhì)譜儀聯(lián)用，UPS2中含有48種內(nèi)標(biāo)蛋白6個(gè)不同濃度，共鑒定其中24種，其實(shí)際含量結(jié)果如下表，含量范圍為0.05-444.88ppm，實(shí)際含量>1ng（10ppm）的16種內(nèi)標(biāo)蛋白全部鑒定到，實(shí)際含量在0.06-0.38ng（0.6-3.8ppm）范圍內(nèi)共鑒定到6種，此方案的靈敏度足以滿足生物藥領(lǐng)域客戶的需求。

本次實(shí)驗(yàn)中鑒定到UPS2內(nèi)標(biāo)蛋白的種類及其實(shí)際含量

　　2. 疫苗工藝及質(zhì)量控制解決方案

　　裂解劑

　　在疫苗制備過程中加入裂解劑，如乙醚、聚山梨酸酯80、脫氧膽酸鈉等，以裂解病毒粒子，再經(jīng)純化工藝去除部分病毒成分，以有效降低不良反應(yīng)，如甲型肝炎滅活疫苗（人二倍體細(xì)胞）生產(chǎn)流程中提純工藝階段需用去氧膽酸鈉進(jìn)行細(xì)胞裂解，疫苗中殘留去氧膽酸的含量不得高于20μg/mL。

　　新版美國藥典收錄CAD檢測器作為去氧膽酸殘留和有關(guān)物質(zhì)的方法。CAD檢測器結(jié)合Acclaim Surfactant色譜柱，可同時(shí)對(duì)膽酸、去氧膽酸、熊去氧膽酸、豬去氧膽酸、鵝去氧膽酸和牛黃脫氧膽酸進(jìn)行檢測，獲得高分離度、高靈敏度和重現(xiàn)性的結(jié)果。

　　培養(yǎng)基

　　牛血清白蛋白用于細(xì)胞培養(yǎng)，但它也是一種異種蛋白，殘留量偏高的情況下，多次使用能引發(fā)機(jī)體的過敏反應(yīng)。藥典規(guī)定測定病毒類疫苗中殘余牛血清白蛋白的含量，應(yīng)不超過50ng/劑。

　　采用MabPac SEC體積排阻色譜柱結(jié)合生物惰性液相Vanquish對(duì)牛血清白蛋進(jìn)行了直接測定，無需衍生，能有效排除小分子的干擾，可以排除無/弱紫外吸收大分子輔料干擾（如吐溫、PEG等），適用于高鹽和寬pH范圍緩沖液，有效防止蛋白吸附。

　　佐劑檢測

　　鋁佐劑是最早使用的佐劑，也是目前唯一廣泛使用的疫苗佐劑，鋁佐劑具有便宜、安全、合成簡單的優(yōu)點(diǎn)，但也存在易在體內(nèi)蓄積、可能刺激I gE 產(chǎn)生、無法生物降解等問題。在疫苗成品中需對(duì)鋁含量進(jìn)行檢測，如13 價(jià)肺炎球菌結(jié)合疫苗中鋁含量應(yīng)為 0.15-0.35 mg/ml，吸附白喉疫苗中氫氧化鋁不得高于0.3mg/ml。

　　對(duì)于佐劑中Al含量進(jìn)行檢測，AA、ICPOES和ICP-MS方法均具有極高的靈敏度，iCE3000系列AA優(yōu)異的光學(xué)系統(tǒng)結(jié)構(gòu)、高精度控溫和背景扣除技術(shù)，可將Al元素在石墨爐分析中的發(fā)射干擾有效去除；而iCAP Qnova系列ICP-MS專利技術(shù)的Q Cell碰撞池結(jié)合低質(zhì)量數(shù)剔除技術(shù)，能夠?qū)l元素在質(zhì)譜分析中的多原子干擾做到完全去除，這些技術(shù)的使用確保了佐劑中Al檢測獲得最佳的準(zhǔn)確性和穩(wěn)定性等方法學(xué)數(shù)據(jù)要求。