薄層層析的定量分析方法介紹
洗脫測(cè)定法
①洗脫測(cè)定法,將展開后的組分斑點(diǎn)處的吸附劑刮下,用適宜溶劑將組分洗脫溶出,然后用適當(dāng)方法進(jìn)行定量測(cè)定。常用方法為比色法、紫外-可見分光光度法,也可用電化學(xué)分析法等。
原位掃描法
②原位掃描法,將展開后的薄層板放在光密度計(jì)內(nèi),以一定波長(zhǎng)的光照射,同時(shí)使斑點(diǎn)移過(guò)光路,由于斑點(diǎn)對(duì)光的吸收,可繪出峰形曲線,由峰面積與標(biāo)準(zhǔn)樣品的吸收相比較而求出含量。
薄層層析法
薄層層析法以吸附層析使用最為普遍。常用的吸附劑為硅膠、氧化鋁等。薄層層析和其他層析法一樣,除吸附法外,也可進(jìn)行分配、離子交換、分子排阻等機(jī)理的層析,即將鋪制薄層的材料相應(yīng)換為涂以固定相的載體、離子交換劑、凝膠等,其操作與吸附法基本相同。
制板 鋪制薄層板時(shí),要求基底板潔凈平整,可用干法或濕法鋪制。現(xiàn)常用濕法制板,即將吸附劑和粘合劑(如燒石膏)按一定比例混合,加入適量水調(diào)勻,用涂布器將此勻漿緩慢地移過(guò)基底板,放置晾干,再經(jīng)適當(dāng)烘烤活化后即可使用。如不加粘合劑和水,直接將吸附劑均勻地鋪成薄層,則為干法制板。現(xiàn)在市場(chǎng)上已有各種制好的薄層板出售,統(tǒng)稱預(yù)制板。
展開 有多種方式,以上行法最為常用。將薄層板垂直或傾斜放置,將展開溶劑加于低部,使之自下向上移動(dòng)。下行法則為用濾紙將溶劑引至薄層上端,使其自上向下流動(dòng)。平行展開時(shí),將板平放,溶劑被吸上至薄層板點(diǎn)有樣品的一端,進(jìn)行展開。使用圓形薄層板時(shí),將樣品點(diǎn)在圓心附近,使溶劑自圓心向圓周方向移動(dòng),稱為環(huán)形展開或徑向展開;將樣品點(diǎn)在圓周位置,使溶劑自圓周向圓心移動(dòng)的為向心展開,適用于f值大的組分的分離。將點(diǎn)樣品處附近的吸附劑刮去,使溶劑只能通過(guò)樣品點(diǎn)附近的較窄部分前進(jìn)展開,因而溶劑前緣呈弧形的展開方式,也稱徑向展開,這種方式對(duì)較難分離的組分可能效果好些。