3.2 細(xì)胞成分檢測?

3.2.1 生存素( survivin) 生存素是凋亡抑制蛋白,在多種人類腫瘤中均可上調(diào)。研究發(fā)現(xiàn)尿液標(biāo)本中生存素水平檢測總的敏感度、特異度、陽性和陰性預(yù)測值分別為64%、93%、92%和67% [16],這些指標(biāo)均優(yōu)于傳統(tǒng)的尿液細(xì)胞學(xué)檢查和NMP22檢測,且尿液中高水平的生存素與膀胱癌的患病風(fēng)險(xiǎn)增加和高分級有關(guān)。更值得注意的是, 在表淺性膀胱癌的研究中, 生存素表達(dá)的高低與表淺性膀胱癌的無瘤生存密切相關(guān), 表達(dá)明顯升高者, 預(yù)后差, 多因素分析結(jié)果表明生存素是判斷表淺性膀胱癌預(yù)后的一個獨(dú)立指標(biāo)。如果這些結(jié)果在大樣本的研究得到確證,尿標(biāo)本中生存素水平的檢測將能夠替代細(xì)胞學(xué)檢查,成為膀胱癌診斷和監(jiān)測的理想指標(biāo)。

3.2.2 端粒酶 端粒是位于DNA鏈3’末端的核苷酸序列，在DNA復(fù)制時并不被復(fù)制，因此每一循環(huán)的復(fù)制約損失50～200個核苷酸，最終促使細(xì)胞停止分裂。端粒酶將含有6個核苷酸（TTAGGG）的重復(fù)序列加到DNA鏈的3’末端上，從而維持染色體的長度。在正常成人體細(xì)胞內(nèi)不表達(dá),但在多種腫瘤細(xì)胞中表達(dá)。利用端粒酶診斷膀胱癌的敏感度差異較大，多數(shù)研究結(jié)果為70 %～86 %; 特異度為24 %～90 %, 但大多為60 %～70 % [17]。檢測敏感度的差異與標(biāo)本的收集、膀胱癌的分期、分級和檢測方法有關(guān)。不同方法采集的尿液標(biāo)本其敏感度不一樣。在血尿、前列腺增生、膀胱炎等疾病時檢測端粒酶可有假陽性, 有報(bào)道假陽性率甚至高達(dá)76%。由于膀胱癌患者往往合并有其他泌尿系病變, 其次尿液的收集、保存與端粒酶活性密切相關(guān), 因此, 目前這一檢測手段在臨床上的應(yīng)用受到了限制。另外，RT－PCR檢測的方法正在發(fā)展中，顯示出了更好的特異性。?

3.2.3 核基質(zhì)蛋白（BLCA-4） 腫瘤與正常細(xì)胞的核基質(zhì)蛋白組成有所不同，有6種核基質(zhì)蛋白（BLCA－1～6）只存在于腫瘤組織中，而另有3種核基質(zhì)蛋白僅存在于正常膀胱組織中。初步的研究顯示其診斷BTCC 的敏感度96.4 % ,特異度100 %[18],同分級分期無關(guān),BLCA-4 的升高同尿路感染、抽煙和膀胱炎關(guān)系不大。脊髓損傷的患者尿液中BLCA-4 的升高可能預(yù)示著膀胱腫瘤的發(fā)生。BLCA-4 的研究報(bào)道尚少,其臨床意義尚需進(jìn)一步的研究，類似標(biāo)志物還有新近發(fā)現(xiàn)的BLAC－1[19]。

3.2.4 黏蛋白-7 黏蛋白是尿路上皮黏膜的保護(hù)屏障，黏蛋白基因MUC7的上調(diào)可能導(dǎo)致糖基化類型異常、增加腫瘤浸潤和轉(zhuǎn)移潛力。尿液標(biāo)本中MUC7基因表達(dá)檢查的敏感度和特異度分別為68%和87% ，MUC7 基因表達(dá)和腫瘤分級、分期和大小之間沒有相關(guān)性。MUC7基因表達(dá)可能成為一種非侵入性的篩選方法[4]。

3.2.5 透明質(zhì)酸和透明質(zhì)酸酶(HA/ HAase) 透明質(zhì)酸酶是一種降解細(xì)胞外基質(zhì)透明質(zhì)酸的內(nèi)生性糖甙酶,在腫瘤侵襲過程中發(fā)揮了重要作用。在膀胱癌患者尿液中HA 的含量升高5～7 倍,而HAase 僅在高分級腫瘤中有升高( G2/ G3 腫瘤中升高4～7 倍)。HA、HAase 診斷膀胱癌的敏感度、特異度在86 %～92 %[2]。

3.2.6 白細(xì)胞分化抗原44 (CD44) CD44 是一種廣泛分布于細(xì)胞表面的糖蛋白,被認(rèn)為是一種細(xì)胞外黏附分子。據(jù)報(bào)道腫瘤進(jìn)程與CD44 的表達(dá)量及分布密切相關(guān)。在尿液脫落癌細(xì)胞中,CD44 基因也有異常轉(zhuǎn)錄。Western 雜交試驗(yàn)發(fā)現(xiàn),在75 %膀胱癌患者尿液細(xì)胞溶解產(chǎn)物中發(fā)現(xiàn)幾種相對分子量高的CD44(160 000) ,對照組則無。免疫組織化學(xué)研究發(fā)現(xiàn),隨著正常膀胱黏膜表皮細(xì)胞的分化和成熟,CD44 蛋白表達(dá)下降,而癌細(xì)胞中的CD44 蛋白則過量表達(dá)并可穿透表皮層進(jìn)入尿液中。CD44有可能成為膀胱癌的檢測指標(biāo)之一[20]。

3.2.7 中心小體異常 癌細(xì)胞基因不穩(wěn)定可以由非整倍體所致,非整倍體是一種染色體的異常平衡,可能來自中心小體的功能異常,中心小體是負(fù)責(zé)進(jìn)行平衡的染色體聚集的細(xì)胞器。M. D. Anderson癌中心的Jiang等[21]采用針對中心小體主要成分γ2微管蛋白的抗體檢測了膀胱沖洗液標(biāo)本中細(xì)胞內(nèi)中心小體的數(shù)量和分布,約90%的膀胱癌患者膀胱沖洗液標(biāo)本中存在中心小體異常,對照組中沒有發(fā)現(xiàn),中心小體異常隨著腫瘤分級的提高在數(shù)量和大小上增加,顯示出非整倍體的標(biāo)本均有中心小體異常。此方法可能是一種比檢測DNA 非整倍體或多靶點(diǎn)F ISH法更簡單、更敏感的檢測染色體異常的方法。雖然以前的研究提出了幾種其他人類惡性腫瘤有中心小體異常，此研究未被其他研究者所證實(shí)。但是考慮到甚至在低分級膀胱癌中也有中心小體的顯著異常,此標(biāo)志物可能被用于膀胱癌的早期檢測，成為腫瘤進(jìn)展的標(biāo)志物。

3.3 其 他?

此外，一些新的膀胱癌或分子標(biāo)志物如p53,H-ras,DBC突變，MDM2、Fas-Fas配體系統(tǒng)、Bax、COX2、E2F3、TIMP、DNMT1表達(dá)等都顯示出了良好的理論價值，但還需要大量實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的支持。?

4. 小 結(jié)?

在最近剛召開的第100屆美國泌尿外科學(xué)會(AUA)年會上，依然只有尿脫落細(xì)胞學(xué)檢查及尿NMP22檢測是推薦的篩查手段，研究膀胱癌標(biāo)志物依然任重而道遠(yuǎn)。但合理聯(lián)合應(yīng)用現(xiàn)有的無創(chuàng)傷檢查手段, 可推遲或減少膀胱鏡檢查。隨著基因芯片技術(shù)的發(fā)展, 對膀胱癌的認(rèn)識不斷深入, 膀胱癌分子標(biāo)志譜更完善, 相信在不遠(yuǎn)的將來, 通過尿液診斷和監(jiān)測膀胱癌必將有新的突破。?



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