qpcr原理及流程
一、QPCR原理
“qpcr原理是一種在DNA擴(kuò)增反應(yīng)中，以熒光化學(xué)物質(zhì)測(cè)每次聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）循環(huán)后產(chǎn)物總量的方法；應(yīng)用于對(duì)PCR進(jìn)程進(jìn)行實(shí)時(shí)檢測(cè)。
檢測(cè)方法：加尾法和頸環(huán)法
miRNA很短，用mRNA的反轉(zhuǎn)錄方法無(wú)法得到足以定量的cDNA。所以，miRNA的反轉(zhuǎn)要求將miRNA序列進(jìn)行延長(zhǎng)，目前常用的序列延長(zhǎng)反轉(zhuǎn)錄法包括莖環(huán)法和加尾法。
特色：
①RNA加尾和引物延伸法，樣本用量少（1μg）且不需分離miRNA。
②采用通用反轉(zhuǎn)錄引物，一次反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物可用于上百個(gè)miRNA檢測(cè)。
③檢測(cè)通量高，可同時(shí)檢測(cè)數(shù)十個(gè)miRNAs。
④不同末端成熟miRNA都能被加尾和反轉(zhuǎn)錄，保證定量準(zhǔn)確性。
⑤配合QIAGEN試劑盒，保證實(shí)驗(yàn)可靠性；
⑥擴(kuò)增產(chǎn)物特異性高，通過(guò)產(chǎn)物熱解離曲線（融解曲線）判斷。
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