氣相色譜如何繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線

2021.11.30

第四節(jié) 校準(zhǔn)曲線

校準(zhǔn)曲線包括標(biāo)準(zhǔn)曲線和工作曲線，前者用標(biāo)準(zhǔn)溶液系列直接測量，沒有經(jīng)過預(yù)處理過程，這對于樣品往往造成較大誤差;而后者所使用的標(biāo)準(zhǔn)溶液經(jīng)過了與樣品相同的消解、凈化、測量等全過程。

凡應(yīng)用校準(zhǔn)曲線的分析方法，都是在樣品測得信號值后，從校準(zhǔn)曲線上查得其含量(或濃度)。因此，繪制準(zhǔn)確的校準(zhǔn)曲線，直接影響到樣品分析結(jié)果的準(zhǔn)確與否。此外，校準(zhǔn)曲線也確定了方法的測定范圍。

1.校準(zhǔn)曲線的繪制

用一系列被測物標(biāo)準(zhǔn)溶液，按照標(biāo)準(zhǔn)方法規(guī)定的步驟，將被測物轉(zhuǎn)變?yōu)橛猩芤?。制備好的?biāo)準(zhǔn)系列和空白，在方法選定的波長下，測定吸光度。已被測物濃度為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)，繪制校準(zhǔn)曲線。

1)對標(biāo)準(zhǔn)系列，溶液以純?nèi)軇閰⒈冗M行測量后，應(yīng)先作空白校正，然后繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線;

2)標(biāo)準(zhǔn)溶液一般可直接測定，但如試樣的預(yù)處理較復(fù)雜致使污染或損失不可忽略時，應(yīng)和試樣同樣處理后再測定。

3)校準(zhǔn)曲線的斜率常隨環(huán)境溫度、試劑批號和貯存時間等實驗條件的改變而變動。因此，在測定試樣的同時，繪制校準(zhǔn)曲線最為理想，否則應(yīng)在測定試樣的同時，平行測定零濃度和中等濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液各兩份，取均值相減后與原校準(zhǔn)曲線上的相應(yīng)點核對，其相對差值根據(jù)方法精密度不得大于5%～10%，否則應(yīng)重新繪制校準(zhǔn)曲線。

2. 校準(zhǔn)曲線的檢驗

1)線性檢驗: 即檢驗校準(zhǔn)曲線的精密度。對于以4～6個濃度單位所獲得的測量信號值繪制的校準(zhǔn)曲線，分光光度法一般要求其相關(guān)系數(shù) | r | ≥0.9990，否則應(yīng)找出原因并加以糾正，重新繪制合格的校準(zhǔn)曲線。

2)截距檢驗：即檢驗校準(zhǔn)曲線的準(zhǔn)確度，在線性檢驗合格的基礎(chǔ)上，對其進行線性回歸，得出回歸方程 y= a+bx ，然后將所得截距a與0作t檢驗，當(dāng)取95%置信水平，經(jīng)檢驗無顯著性差異時，a可做0處理，方程簡化為y= bx，移項得x=y/b。在線性范圍內(nèi)，可代替查閱校準(zhǔn)曲線，直接將樣品測量信號值經(jīng)空白校正后，計算出試樣濃度。

當(dāng)a與0有顯著性差異時，表示校準(zhǔn)曲線的回歸方程計算結(jié)果準(zhǔn)確度不高，應(yīng)找出原因予以校正后，重新繪制校準(zhǔn)曲線并經(jīng)線性檢驗合格。在計算回歸方程，經(jīng)截距檢驗合格后投入使用。

回歸方程如不經(jīng)上述檢驗和處理，就直接投入使用，必將給測定結(jié)果引入差值相當(dāng)于解決a的系統(tǒng)誤差。

3) 斜率檢驗: 即檢驗分析方法的靈敏度，方法靈敏度是隨實驗條件的變化而改變的。在完全相同的分析條件下，僅由于操作中的隨機誤差導(dǎo)致的斜率變化不應(yīng)超出一定的允許范圍，此范圍因分析方法的精度不同而異。例如，一般而言，分子吸收分光光度法要求其相對差值小于5%，而原子吸收分光光度法則要求其相對差值小于10%等等。

3. 校準(zhǔn)曲線的控制

被測物轉(zhuǎn)變?yōu)橛猩芤旱姆磻?yīng)稱為顯色反應(yīng)或發(fā)色反應(yīng)。顯色反應(yīng)的介質(zhì)PH條件、顯色劑用量、顯色反應(yīng)的時間和溫度、為消除共存物干擾而加入的掩蔽劑、甚至加試劑的順序，都要按照方法步驟的要求執(zhí)行。有時，標(biāo)準(zhǔn)系列雖然不像實際試樣那樣組成復(fù)雜，但仍要求與試樣進行同樣的處理步驟，以便控制校準(zhǔn)曲線上的數(shù)據(jù)點的空白、回收率等因素。

建立校準(zhǔn)曲線時，測量吸光度的參比有兩種選擇。

第一種方法用純?nèi)軇┳鲄⒈?，兩個比色皿都放溶劑時，“樣品比色皿” 的吸光度測定值為比色皿成對性校正值，此后所有樣品吸光度測定值都須扣除此值，進行校正。然后，以純?nèi)軇閰⒈龋瑴y定空白及標(biāo)準(zhǔn)系列的吸光度，繪制校準(zhǔn)曲線。

第二種方法直接用空白為參比。當(dāng)兩個比色皿都放空白時，測定比色皿成對性校正值，然后測定標(biāo)準(zhǔn)系列的吸光度，繪制校準(zhǔn)曲線。兩種方法得到的兩條校準(zhǔn)曲線互相平行，但第一種方法可測定空白的水平，后一種方法不能測定空白，理論上校準(zhǔn)曲線通過原點。若空白為零，兩條校準(zhǔn)曲線重合。無論用什么作參比，實樣測定時應(yīng)該使用與建立校準(zhǔn)曲線相同的比色皿和同樣的參比。

比色皿的成對性校正對于使用已久的比色皿是必要的，尤其是測量吸光度很小的樣品時，校正可保證測量值的可靠性和重復(fù)性。