CWL-M高效液液萃取機頂空液相微萃取-氣相色譜法
采用CWL-M高效液液萃取機液相微萃取與氣相色譜聯(lián)用技術(shù)測定阿奇霉素中二氯甲烷和丙酮的殘留量。以苯乙酮為萃取溶劑，萃取時間30 min，萃取溫度60℃，萃取液滴體積2μL。在濃度為20.0μg/g~120. 0μg / g范圍內(nèi)，二氯甲烷的外標曲線為Y =0.009 9X -0. 088 2，相關(guān)系數(shù)R2?= 0.983 1;丙酮的外標曲線為Y = 0. 029 1X - 0. 040 5，相關(guān)系數(shù)RZ = 0. 9865;阿奇霉素中丙酮測定結(jié)果的相對標準偏差(RSD%)為1. 19，加標回收率為93. 49%一101.1%;方法的最低檢測限:二氯甲烷為0.298μg/g，丙酮為0. 059μg/g。
阿奇霉素是治療敏感細菌所引起的感染常用藥物。由于藥品在生產(chǎn)過程中引入了有害的有機溶劑二氯甲烷和丙酮，因此必對成品藥進行有機溶劑的殘留量檢測，保證用藥的安全性川。液相微萃取是1996年發(fā)展起來的一種新型樣品前處理技術(shù)，該技術(shù)具有富集、效果好、集采樣、萃取和濃縮于一體、靈敏度高、操作簡單、快捷、廉價、所需有機溶劑少等優(yōu)點Cz7。本文采用頂空液相微萃取一氣相色譜聯(lián)用技術(shù)測定阿奇霉素中二氯甲烷和丙酮含量。
1.實驗部分
1.1儀器與試藥
GC112A氣相色譜儀，火焰離子化檢測器，5μL微量進樣器，DF一II集熱式磁力加熱攪拌器;二氯甲烷、丙酮、苯乙酮(均為分析純)，阿奇霉素(醫(yī)用品)。
1.2液滴保護管的制作
取用一內(nèi)徑約1 mm的聚四氟乙烯管1. 5 cm，用小刀片將其表面割成八條均勻平行的條狀孔，使其內(nèi)的有機溶劑與頂空瓶中的標準溶液能有充足的接觸面積而又不發(fā)生掉落，與微量進樣器相連的一端再插入一內(nèi)徑更小的膠管，使微量進樣器插入后有較好的密封性。
1.3標準溶液的配制
量取0. 15 mL二氯甲烷、0. 25 mL丙酮和0.2gOP一10乳化劑至100 mL容量瓶內(nèi)，振蕩搖勻，加水定容。取此溶液1 mL至另一100 mL容量瓶中，加水定容，得到二氯甲烷、丙酮濃度分別20μg / mL的水溶液。
1.4基體物質(zhì)的制備
取4. 0 g阿奇霉素樣品，打開膠囊將其中的粉末置于小燒杯中，放置80℃烘箱內(nèi)烘8h，以去除丙酮和二氯甲烷，此白色粉末供空白基體用。
1.5氣相色譜條件
色譜柱:2 m x Φ3 mm i. d.不銹鋼柱，內(nèi)填充po-rapack P (80一100);柱溫:15 8℃;恒溫1 ?min，以40℃?/min升溫至180℃，恒溫15 min ; FID檢測器，氮氣作載氣，流速:35 mL/min ;氫氣流速:40 mL / min ;空氣流速:300 mL / min。
1.6外標曲線的制作
分別量取二氯甲烷和丙酮的20 μg / mL標準溶液0.5,1.0,1.5,2.0,2.5,3.0 mL于6個15 mL頂空瓶中，加5 mL蒸餾水，再分別加入2 g NaCI和0. 5 g藥物空白基體，放入磁攪拌子。使用5 μL微量注射器抽取2μL苯乙酮，將微量注射器的針尖置于樣品的頂空中，小心推動注射器活塞使萃取溶劑懸在注射器的針尖上，暴露于樣品的頂空中，在萃取溫度為35℃下萃取20 min后，將萃取溶劑液滴吸回注射器，并將注射器針頭從頂空瓶中移出，完成萃取，然后進樣進行氣相色譜分析，制作色譜峰高與濃度的關(guān)系曲線。
1.7樣品分析
取0. 50 g阿奇霉素樣品于15 mL頂空瓶內(nèi)，加5mL蒸餾水，再向瓶內(nèi)加入2 g氯化鈉和磁攪拌子，其它步驟同1. 6節(jié)。根據(jù)色譜峰高，通過外標曲線得到樣品阿奇霉素中丙酮和二氯甲烷的濃度，并計算出樣品阿奇霉素中二種溶劑的殘留量。
2.結(jié)果與討論
2.1萃取液的選擇
選擇合適的有機溶劑是提高分析物靈敏度的關(guān)鍵，其選擇的基本原則是“相似相溶原理”，即溶劑的性質(zhì)必須與分析物的性質(zhì)相匹配，才能保證溶劑對分析物有較強的萃取富集能力。
本實驗在相同的色譜條件、萃取時間、萃取溫度的條件下，在分析二氯甲烷和丙酮時，分別對苯乙酮、環(huán)己酮、苯甲酸乙酷、十四烷有機溶劑為萃取溶劑進行了考察。結(jié)果發(fā)現(xiàn)環(huán)己酮粘度較大，易于形成液滴，但由于與水易形成輕基，對分析物吸附效果較差。苯甲酸乙酷易揮發(fā)，液滴不穩(wěn)定，吸附效果也較差，被測物峰面積與濃度的線性關(guān)系不好。十四烷粘度小，不易成球狀，對被測物吸附效果差。苯乙酮具有較好的物理性能，被測物峰高與濃度的線性關(guān)系良好。因此本試驗選擇苯乙酮作為樣品中二氯甲烷和丙酮測定的液相微萃取溶劑。2. 2液滴體積的選擇
分別用5μL微量進樣器取1,2,3μL苯乙酮，在60℃萃取30 min，通過比較色譜峰高及萃取狀況，1μL的液滴萃取效率差，3μL液滴容易掉落，2μL液滴較適合。
2. 3氣一液平衡時間的影響
分別量取含有二氯甲烷和丙酮的標準溶液2. 5mL于5個15 mL頂空瓶內(nèi)，加蒸餾水至5 mL，再分別加2g氯化鈉和基體物。使用5μL進樣器抽取2μL苯乙酮作為萃取有機溶劑，分別萃取10,15,20,25 , 30 min后，進行氣相色譜分析，以峰高與時間作圖，得到最佳萃取時間。
圖1表明了二氯甲烷和丙酮的色譜峰高與萃取時間的關(guān)系。
結(jié)果表明，二氯甲烷和，丙酮的萃取氣一液平衡最佳時間均為20 min 。
2. 4標準曲線
根據(jù)1.6節(jié)操作得到的實驗數(shù)據(jù)，以峰高對應(yīng)的濃度制作標準曲線，得出回歸方程。
二氯甲烷的標準曲線見圖2;丙酮的標準曲線見圖3。
線性回歸方程為Y=0.029 1X一0. 040 5，相關(guān)系數(shù)R2= 0. 986 5 。
2. 5樣品分析結(jié)果選取市售阿奇霉素藥品進行分析測定，結(jié)果見表1.
2. 6加標回收率
向15 mL頂空瓶中加入不同量的丙酮標準溶液，加蒸餾水至5 mL，再向頂空瓶中加入0.500 0 g被測樣品和2. 0 g氯化鈉。根據(jù)公式計算回收率。計算公式為:
回收率=(ma-mi)?/m標x 100 %
式中:ma一加入標準物質(zhì)后測定量
mi一樣品中被測物的原有量
m標一加入標準物質(zhì)的量
2. 7最低檢出限
實驗中，色譜基線噪聲值0. 01 mV，3Y = 0. 03mV，由外標曲線方程Y=kX+b得到丙酮最低檢測限理論值為0. 242μg / g，配制丙酮濃度為0. 2μg/g的樣品，經(jīng)過氣相色譜分析得到其色譜峰高為0. 102my，通過比例關(guān)系0. 102/0. 03 =0. 2/C (C為丙酮的最低檢測限)，可求出C = 0 . 059 μg / g，即丙酮的最低檢測限為0.059μg/g。同理，二氯甲烷的峰高為0. 021 mV，可求出二氯甲烷的最低檢測限為0. 286μg/g。
使用苯乙酮為萃取劑，通過頂空液相微萃取一氣相色譜聯(lián)用技術(shù)來測定阿奇霉素中二氯甲烷和丙酮的含量，方法簡便易行，結(jié)果準確可靠。
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技術(shù)原理
