1.目的
檢測生產(chǎn)車間空氣、操作人員手部、與食品有直接接觸面的機(jī)械設(shè)備的微生物指標(biāo)，生產(chǎn)區(qū)域環(huán)境當(dāng)中病原微生物的監(jiān)控，達(dá)到規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)，以控制食品成品的質(zhì)量。
2.參照標(biāo)準(zhǔn)
中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)《一次性使用衛(wèi)生用品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》GB15979－2002、《HACCP原理與實(shí)施》、中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)《公告場所空氣微生物檢驗(yàn)方法細(xì)菌總數(shù)測定》GB/T 18201.1-2013、出入境檢驗(yàn)檢疫局二000四年《出入食品微生物檢驗(yàn)培訓(xùn)教材》中《出入食品生產(chǎn)廠衛(wèi)生細(xì)菌檢驗(yàn)方法》、日本東京冷凍食品檢驗(yàn)方法。
3.采樣與檢測方法
3.1空氣的采樣與測試方法：
3.1.1樣品采集：
(1)取樣頻率：
a)車間轉(zhuǎn)換不同衛(wèi)生要求的產(chǎn)品時，在加工前進(jìn)行采樣，以便了解車間衛(wèi)生清掃消毒情況。
b)全廠統(tǒng)一放長假后，車間生產(chǎn)前，進(jìn)行采樣。
c)產(chǎn)品檢驗(yàn)結(jié)果超內(nèi)控標(biāo)準(zhǔn)時，應(yīng)及時對車間進(jìn)行采樣，如有檢驗(yàn)不合格點(diǎn)，整改后再進(jìn)行采樣檢驗(yàn)。
d)實(shí)驗(yàn)性新產(chǎn)品，按客戶規(guī)定頻率采樣檢驗(yàn)。
e)正常生產(chǎn)狀態(tài)的采樣，每周一次。
（2）采樣方法
在動態(tài)下進(jìn)行，室內(nèi)面積不超過30m2，在對角線上設(shè)里、中、外三點(diǎn)，里、外點(diǎn)位置距墻1m；室內(nèi)面積超過30m2，設(shè)東、西、南、北、中五點(diǎn)，周圍4點(diǎn)距墻1m。采樣時，將含平板計(jì)數(shù)瓊脂培養(yǎng)基的平板(直徑9cm)置采樣點(diǎn)(約桌面高度)，并避開空調(diào)、門窗等空氣流通處，打開平皿蓋，使平板在空氣中暴露5 min。采樣后必須盡快對樣品進(jìn)行相應(yīng)指標(biāo)的檢測，送檢時間不得超過4h，若樣品保存于0～4℃條件時，送檢時間不得超過24h。
3.1.2菌落培養(yǎng)：
（1）在采樣前將準(zhǔn)備好的平板計(jì)數(shù)瓊脂培養(yǎng)基平板置37℃±1℃ 培養(yǎng)24 h，取出檢查有無污染，將污染培養(yǎng)基剔除。
（2）將已采集樣品的培養(yǎng)基在4h內(nèi)送實(shí)驗(yàn)室，細(xì)菌總數(shù)于37℃±1℃培養(yǎng)48h觀察結(jié)果，計(jì)數(shù)平板上細(xì)菌菌落數(shù)。
（3）菌落計(jì)算：
a) 記錄平均菌落數(shù)，用“個/皿”來報(bào)告結(jié)果。用肉眼直接計(jì)數(shù)，標(biāo)記或在菌落計(jì)數(shù)器上點(diǎn)計(jì)，然后用5～10倍放大鏡檢查，不可遺漏。
b) 若培養(yǎng)皿上有2個或2個以上的菌落重疊，可分辨時仍以2個或2個以上菌落計(jì)數(shù)。
3.2工作臺（機(jī)械器具）表面與工人手表面采樣與測試方法：
3.2.1樣品采集：
(1)取樣頻率：
a)車間轉(zhuǎn)換不同衛(wèi)生要求的產(chǎn)品時，在加工前進(jìn)行擦拭檢驗(yàn)，以便了解車間衛(wèi)生清掃消毒情況。
b)全廠統(tǒng)一放長假后，車間生產(chǎn)前，進(jìn)行全面擦拭檢驗(yàn)。
c)產(chǎn)品檢驗(yàn)結(jié)果超內(nèi)控標(biāo)準(zhǔn)時，應(yīng)及時對車間可疑處進(jìn)行擦拭，如有檢驗(yàn)不合格點(diǎn)，整改后再進(jìn)行擦拭檢驗(yàn)。
d)實(shí)驗(yàn)新產(chǎn)品，按客戶規(guī)定擦拭頻率擦拭檢驗(yàn)。
e)對工作表面消毒產(chǎn)生懷疑時，進(jìn)行擦拭檢驗(yàn)。
f)正常生產(chǎn)狀態(tài)的擦拭，每周一次。
（2） 采樣方法：
a) 工作臺（機(jī)械器具）：用浸有滅菌生理鹽水的棉簽在被檢物體表面（取與食品直接接觸或有一定影響的表面）取25cm2 的面積，在其內(nèi)涂抹10次，然后剪去手接觸部分棉棒，將棉簽放入含10mL滅菌生理鹽水的采樣管內(nèi)送檢。
b) 工人手：被檢人五指并攏，用浸濕生理鹽水的棉簽在右手指曲面，從指尖到指端來回涂擦10次，然后剪去手接觸部分棉棒，將棉簽放入含10mL滅菌生理鹽水的采樣管內(nèi)送檢。
（3）采樣注意事項(xiàng)：
擦拭時棉簽要隨時轉(zhuǎn)動，保證擦拭的準(zhǔn)確性。對每個擦拭點(diǎn)應(yīng)詳細(xì)記錄所在分場的具體位置、擦拭時間及所擦拭環(huán)節(jié)的消毒時間。
3.2.2 細(xì)菌·大腸菌群的檢測培養(yǎng):
樣液稀釋：將放有棉棒的試管充分振搖。此液為1：10稀釋液。如污染嚴(yán)重，可十倍遞增稀釋，吸取1ml 1：10樣液加9ml無菌生理鹽水中，混勻，此液為1：100稀釋液。
3.2.2.1 細(xì)菌總數(shù)：
（1）以無菌操作，選擇1～2個稀釋度各取1ml樣液分別注入到無菌平皿內(nèi)，每個稀釋度做兩個平皿（平行樣），將已融化冷至45℃左右的平板計(jì)數(shù)瓊脂培養(yǎng)基傾入平皿，每皿約15~20ml，充分混合。
（2）待瓊脂凝固后，將平皿翻轉(zhuǎn)，置36℃±1℃ 培養(yǎng)48 h后計(jì)數(shù)。
（3）結(jié)果報(bào)告：報(bào)告每25cm2食品接觸面中或每只手的菌落數(shù)。