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直接免疫熒光和間接免疫熒光染色方法的異同

2022.7.25

1、接免疫熒光和間接免疫熒光染色方法的不同:

直接免疫熒光的實(shí)驗(yàn)方案通常較短,因?yàn)樗恍枰粋€(gè)標(biāo)記步驟。間接免疫熒光使用偶聯(lián)二抗檢測一抗會增加額外的操作步驟。



直接免疫熒光方法的實(shí)驗(yàn)方案步驟較少,更簡單。間接免疫熒光方法中必須選擇適當(dāng)?shù)亩?,增加了?fù)雜度。這種情況在需要使用多個(gè)二抗的多色實(shí)驗(yàn)中尤為突出,每個(gè)二抗需要靶向不同的物種并偶聯(lián)至不同染料。


直接免疫熒光方法中獲得的信號與間接方法相比可能較弱,因?yàn)橹苯臃椒ㄖ袥]有使用二抗進(jìn)行信號放大。免疫熒光多個(gè)二抗結(jié)合一抗可使信號放大。

2、直接免疫熒光和間接免疫熒光染色方法的相同之處:

免疫熒光 (IF) 或細(xì)胞成像技術(shù)使用抗體將熒光染料(也稱為熒光素或熒光物)標(biāo)記到特異性目標(biāo)抗原上,所用熒光染料有諸如異硫氰酸熒光素 (FITC) 等。而通過化學(xué)方法偶聯(lián)熒光素的抗體被廣泛使用于IF實(shí)驗(yàn)中。

根據(jù)熒光素與一抗還是二抗偶聯(lián),我們將 IF 方法分為兩類:直接?IF-使用單個(gè)抗體,該抗體直接指向目的靶標(biāo),一抗與熒光素直接偶聯(lián);間接?IF-使用兩個(gè)抗體,一抗未偶聯(lián),熒光素偶聯(lián)的二抗指向一抗,并用于檢測。


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