PEG促進(jìn)細(xì)胞融合的注意事項(xiàng)有那些
(1)事先做好兩種原生質(zhì)體融合的識(shí)別標(biāo)記,如色素、缺陷型、抗性標(biāo)記等。
(2)原生質(zhì)體或細(xì)胞密度應(yīng)在105個(gè)/ml,兩種原生質(zhì)體或細(xì)胞按1:1等量混合
(3)PEG誘導(dǎo)融合的效果,同分子量大小及濃度高低密切相關(guān)。分子量和濃度愈大,促進(jìn)細(xì)胞融合的能力愈高,而其粘度及對(duì)細(xì)胞的毒性也隨之增大,故通常以選用分子4000-6000濃度30-50%的PEG進(jìn)行融合為宜。
(4)PEG使細(xì)胞融合或致死劑量界限很狹小,為達(dá)到成功有效的融合,還必須嚴(yán)格掌握PEG的處理時(shí)間。一般加入PEG后,24℃培育10-20min(注意時(shí)間宜短不宜長(zhǎng),過(guò)長(zhǎng)使原生質(zhì)體周?chē)粚幽ば纬赡w,降低融合率),緩緩加入高鈣離子溶液15min后用沖洗液清洗,離心收集細(xì)胞或原生質(zhì)體。
推薦
熱點(diǎn)排行
一周推薦