腦脊液常規(guī)檢查的標(biāo)準(zhǔn)化操作，適用于腦脊液的常規(guī)檢查(物理檢查、蛋白定性、細胞檢查)；

一、腦脊液標(biāo)本的采集：?

1.標(biāo)本種類：腦脊液，由臨床醫(yī)師進行腰椎穿刺采集，必要時可從小腦延腦池或側(cè)腦室穿刺獲得。?

2.標(biāo)本要求：將腦脊液分別收集于3個無菌試管中，第一管作細菌培養(yǎng)，第二管作化學(xué)分析和免疫學(xué)檢查，第三管作一般性狀及顯微鏡檢查。每管收集1-2毫升。?

3.遇高蛋白標(biāo)本時可采用EDTA K2抗凝。?

4.標(biāo)本儲存：立即送檢。?

5.標(biāo)本運輸：室溫運輸。?

6.標(biāo)本拒收標(biāo)準(zhǔn)：污染，久置標(biāo)本。?

7.器材試劑：5%苯酚溶液：取純苯酚25ml,加蒸餾水至500ml，用力振搖，置37℃溫箱內(nèi)1-2天，待完全溶解后，置棕色瓶內(nèi)保存。細胞計數(shù)板；顯微鏡。?

二、腦脊液的常規(guī)檢查：

1.物理檢查：?


?目測腦脊液顏色與透明度:?

(1)觀察顏色。 ? ? ? ?

(2)觀察透明度。?

(3)觀察凝塊或薄膜：收集腦脊液于試管內(nèi)，靜置12-24小時，正常腦脊液不形成薄膜、凝塊和沉淀物。?


?結(jié)果判斷與分析：?

顏色：正常腦脊液是無色透明的液體。在病理情況下，腦脊液可呈不同顏色改變:?

(1)紅色：常由于各種出血引起。腦脊液中出現(xiàn)多量的紅細胞，主要由于穿刺損傷出血、蛛網(wǎng)膜下腔或腦室出血引起。前者在留取三管標(biāo)本時，第一管為血性，以后兩管顏色逐漸變淡，紅細胞計數(shù)結(jié)果也依次減少，經(jīng)離心后上清液呈無色透明。當(dāng)蛛網(wǎng)膜下腔或腦室出血時，三管呈均勻紅色，離心后上清液顯淡紅色或黃色。紅細胞在某些腦脊液中5分鐘后，即可出現(xiàn)皺縮現(xiàn)象，因此紅細胞皺縮現(xiàn)象不能用以鑒別陳舊性或新鮮出血。?

(2)黃色：可因出血、梗阻、郁滯、黃疸等引起。陳舊性蛛網(wǎng)膜下腔或腦室出血，由于紅細胞缺乏蛋白質(zhì)和脂類對膜穩(wěn)定性的保護，很易破壞、溶解，出血4-8小時即可出現(xiàn)黃色。停止出血后，這種黃色仍可持續(xù)3周左右。椎管梗阻如髓外腫瘤，格林-巴利綜合征，當(dāng)腦脊液蛋白質(zhì)量超過1.5g/L時，顏色變黃，其黃色程度與蛋白質(zhì)含量呈正比?；撔阅X膜炎、重癥結(jié)核性腦膜炎時，因腦脊液蛋白質(zhì)含量明顯增加而呈淡黃色或黃色。重癥如核黃疸、新生兒溶血病時腦脊液也呈黃染。?

(3)白色或灰白色：多因白細胞增加所致常見于化膿性腦膜炎。

(4)褐色或黑色：常見于腦膜黑色素瘤。?


透明度：正常腦脊液應(yīng)清晰透明。病毒性腦炎、神經(jīng)梅毒等疾病的腦脊液也可呈透明外觀。腦脊液中白細胞如超過300×106/L時可變?yōu)榛鞚?；蛋白質(zhì)含量增加或含有大量細菌、真菌等也可使其混濁；結(jié)核性腦膜炎常呈毛玻璃樣微混；而化膿性腦膜炎常呈明顯混濁。

填寫報告時用“清晰透明”、“微渾”、“渾濁”等描述。?


凝塊或薄膜：正常腦脊液不形成薄膜、凝塊和沉淀物。若腦脊液內(nèi)蛋白質(zhì)包括纖維蛋白質(zhì)多于10g/L即可出現(xiàn)凝塊或沉淀物，結(jié)核性腦膜炎的腦脊液靜置12-24小時后，可見表面有纖維的網(wǎng)膜形成，取此膜涂片檢查結(jié)核桿菌，陽性率較高。蛛網(wǎng)膜下隙梗阻時，由于阻塞，遠端的腦脊液蛋白質(zhì)含量常高達15g/L，此時腦脊液呈黃色膠凍狀。?

填寫報告百可用“無凝塊”、“有凝塊”、“有薄膜”、“膠凍狀”等描述。?

2、蛋白定性試驗(潘氏法)：


實驗原理：腦脊液中球蛋白與苯酚結(jié)合，可形成不溶性蛋白鹽而下沉，產(chǎn)生白色渾濁或沉淀。?
試驗方法：取潘氏試劑2-3ml于小試管內(nèi)，用毛細滴管滴入腦脊液1-2滴，襯以黑背景，立即觀察結(jié)果。?
?結(jié)果判斷：?

陰性：清晰透明，不顯霧狀；?

極弱陽性（±）：微呈白霧狀，在黑色背景下才能看到； 弱陽性（+）：灰白色云霧狀； 陽性（+）：白色渾濁；?

強陽性（3+）：白色濃絮狀沉淀； 最強陽性（4+）：白色凝塊；?

3、細胞檢查：

在顯微鏡下對腦脊液有形成分進行計數(shù)和分類檢查。


細胞總數(shù)：?

（1） 對澄清的腦脊液可混勻后用滴管直接滴入計數(shù)池，計數(shù)10個大方格內(nèi)紅、白細胞數(shù)，其總和即為每μl的細胞數(shù)。再換算成每升腦脊液中的細胞數(shù)。如細胞較多，可計數(shù)一大格內(nèi)的細胞×10，即得每μl腦脊液中細胞總數(shù)。如用升表示，則再乘以106。也可用生理鹽水或紅細胞稀釋液稀釋后再用人工計數(shù)，或直接用血細胞分析儀進行計數(shù)；?

（2）渾濁或帶血的腦脊液可用血紅蛋白吸管吸取混勻的腦脊液20μl，加入含紅細胞稀釋液0.38ml的小試管內(nèi)，混勻后滴入計數(shù)池內(nèi)，用低倍鏡計數(shù)4個大方格中的細胞總數(shù)，乘以50，即為每μl腦脊液的細胞總數(shù)。?


白細胞數(shù)：

（1）非血性標(biāo)本：小試管內(nèi)放入冰乙酸1-2滴，轉(zhuǎn)動試管，使內(nèi)壁沾有冰乙酸后傾去之，然后滴加混勻的腦脊液3-4滴，數(shù)分鐘后，混勻充入計數(shù)池，按細胞總數(shù)操作中的紅、白細胞計數(shù)法計數(shù)。?

（2）血性標(biāo)本：將混勻的腦脊液用1%冰乙酸溶液稀釋后進行計數(shù)。為剔除因出血而來的白細胞數(shù)，用下式進行校正。?

每μl腦脊液內(nèi)白細胞校正數(shù)：?

? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 每μl腦脊液內(nèi)紅細胞數(shù)×每μl腦脊液內(nèi)白細胞數(shù)?

=每μl腦脊液內(nèi)白細胞未校正數(shù)－ ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ??

? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 每μl血液內(nèi)紅細胞數(shù)?

?

例示：血液內(nèi)紅細胞4 000 000/μl； ?腦脊液內(nèi)紅細胞20 000/μl；?

血液內(nèi)白細胞10 000/μl； ? ? ?腦脊液內(nèi)白細胞60/μl?

?

? ?則：60－ 20 000×10 000 =60-50=10； 即該患者腦脊液內(nèi)白細胞之校正數(shù)為10。 ? ? ? ? ? ? ? ? ?

4 000 000?

（3）成人腦脊液內(nèi)無紅細胞，白細胞極少，其參考范圍：?

腰池中為（0-10）×106/L；

腦室內(nèi)為（0-5）×106/L；?

兒童為（0-15）×106/L，

新生兒為（0-30）×106/L。?

如白細胞達（10-50）×106/L為輕度增加，（50-100）×106/L為中度增加，200×106/L以上顯著增加。


細胞分類：?

（1）直接分類法：白細胞計數(shù)后，將低倍鏡換為高倍鏡，直接在高倍鏡下根據(jù)細胞核的形態(tài)分別計數(shù)單個核細胞（包括淋巴細胞及單核細胞）和多核細胞，應(yīng)數(shù)100個白細胞，并以百分率表示。若白細胞少于100個，應(yīng)直接寫出單核、多核細胞的具體數(shù)字。?

（2）染色分類法：如直接分類不易區(qū)分細胞時，可將腦脊液離心沉淀，取沉淀物2滴，加正常血清1滴，推片制成均勻薄膜，置室溫或37℃溫箱內(nèi)待干，進行瑞氏染色后用油鏡分類。?

如見有不能分類的細胞，應(yīng)另行描述報告，如腦膜白血病或腫瘤時。?

（3）正常腦脊液中白細胞主要為單個核細胞，多為淋巴細胞及大單核細胞，兩者之比約為7：3，偶見內(nèi)皮細胞：軟腦膜和蛛網(wǎng)膜細胞、室管膜細胞、脈絡(luò)膜細胞等。?


?寄生蟲學(xué)檢查：經(jīng)沉淀涂片認真尋找蟲卵、幼蟲等。?

三、質(zhì)量控制：進行室內(nèi)工作人員比對分析，要求差異在10％以內(nèi)。?

四、臨床意義：?


?腦脊液蛋白質(zhì)含量增加，提示患者血腦屏障受破壞，常見于腦、脊髓及腦膜的炎癥、腫瘤、出血等以及腦軟化、腦退化性疾病、神經(jīng)根病變和引起腦脊液循環(huán)梗阻的疾病等，當(dāng)腦脊液中蛋白質(zhì)在10g/L以上時，流出后呈黃色膠凍狀凝固，而且還有蛋白-細胞分離現(xiàn)象，臨床上稱為Froin綜合征，是蛛網(wǎng)膜下腔梗阻性腦脊液的特征。 ? ? ? ?常見中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病的腦脊液檢查特點?
腦脊液常規(guī)檢查的標(biāo)準(zhǔn)化操作
中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染性疾病時腦脊液根據(jù)細胞病理學(xué)變化分三個不同時期：?

① ? ? 急性炎性滲出期，呈粒細胞反應(yīng)；

② ? ? 亞急性增殖期，呈激活淋巴細胞或單核-巨噬細胞反應(yīng)；

③ ? ? 修復(fù)期呈淋巴細胞反應(yīng)?；撔阅X膜炎的急性期變化最突出，持續(xù)時間最長；此期腦脊液細胞數(shù)每微升可高達數(shù)千，以中性粒細胞為主，當(dāng)用抗生素治療后，腦脊液細胞數(shù)迅速下降。梅毒性腦炎亞急性期出現(xiàn)較早，持續(xù)時間較長，腦脊液中細胞數(shù)輕度增加，以淋巴細胞為主，在單純皰疹病毒性腦炎的腦脊液淋巴樣細胞中可發(fā)現(xiàn)胞質(zhì)內(nèi)包涵體，結(jié)核性腦膜炎時其腦脊液細胞數(shù)可增加，但超過500×106/L者較為罕見，在發(fā)病初期以中性粒細胞為主，但很快下降，由于患者多在發(fā)病數(shù)天后才來診治，因此首次腰穿時，腦脊液中中性粒細胞已趨下降而淋巴細胞為多。粒細胞、淋巴及漿細胞同時存在是結(jié)核性腦膜炎的特點。新型隱球菌性腦膜炎可在腦脊液中直接發(fā)現(xiàn)隱球菌，必要時用印度墨汁染色予以確診。


? ? ?中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤腦脊液細胞總數(shù)可正?；蛏愿?，以淋巴細胞為主。腦脊液中能否找到腫瘤細胞取決于腫瘤位置及惡性程度、穿刺部位和采集標(biāo)本的多少。同時也與檢查者技術(shù)水平有關(guān)，采用細胞正玻片離心沉淀儀可提高檢出率。腦脊液找到白血病細胞是白血病腦膜轉(zhuǎn)移的證據(jù)。?
? ? ? 腦血管病腦脊液細胞學(xué)檢查有助于鑒別腦出血或腰穿損傷性出血。前者在早期病后數(shù)小時可見大量紅細胞和明顯中性粒細胞增多，2-3天內(nèi)達高峰，在腦脊液中可發(fā)現(xiàn)吞噬細胞，出血后數(shù)小時至第3天可出現(xiàn)含有紅細胞的吞噬細胞，5天后可見含鐵血黃素吞噬細胞。如為穿刺損傷性出血則不會有上述反應(yīng)。?
? ? ? 腦寄生蟲病不僅腦脊液細胞數(shù)升高，并可見嗜酸性粒細胞增多，約占白細胞的60%或更高。漿細胞增多為另一特點。如將腦脊液離心沉淀物全傾倒在玻片上，在顯微鏡下檢查可發(fā)現(xiàn)血吸蟲卵、阿米巴原蟲、弓形體、旋毛蟲的幼蟲等，甚至還可找至細粒棘球絳蟲的頭節(jié)或頭鉤。?
? ? ? 紅斑狼瘡有時可在腦脊液中找到紅斑狼瘡細胞。?

五、方法學(xué)評價：

潘氏試驗所需標(biāo)本量少，靈敏度高，試劑易得，操作簡便，結(jié)果易于觀察，其沉淀多少與蛋白質(zhì)含量成正經(jīng)比，部分正常腦脊液亦可出現(xiàn)極弱陽性結(jié)果。Ross Jine試驗主要沉淀的是球蛋白，但敏感性較弱，NoneApett試驗可分別檢測球蛋白和白蛋白，但操作較繁，極少選用。細胞計數(shù)為手工法，存在人為誤差。細胞較少時應(yīng)增加計數(shù)池計數(shù)面積。當(dāng)穿刺損傷血管導(dǎo)致血性腦脊液或出血性腦血管病時，計數(shù)細胞總數(shù)已無意義，白細胞數(shù)亦須經(jīng)校正。?

六、操作注意事項：?

1.腦脊液標(biāo)本必須立即送驗及時檢查，放置過久將影響檢驗結(jié)果，使細胞破壞、 變性、或細胞包裹于纖維蛋白凝塊中，導(dǎo)致細胞數(shù)降低、分類不準(zhǔn)確等。存放中的腦脊液葡萄糖會分解，使之含量降低；細菌自溶或破壞可影響細菌檢出率等。?

2. 取材后，必須立即涂片。?

3.推好的血膜片應(yīng)在空氣中搖動，使其盡快干燥，以免細胞變形。天氣寒冷或潮濕時，應(yīng)于37℃溫箱中保溫促干，以免細胞變形縮小。?

4.根據(jù)血膜厚薄，細胞量多少及室內(nèi)溫度等把握好染色時間，使染色效果滿意。?

5.鏡檢時循序檢查，必要時用油鏡確認；并注意整體情況。?

6.細胞計數(shù)時，應(yīng)注意新型隱球菌與白細胞的區(qū)別。前者不溶于乙酸，加優(yōu)質(zhì)墨汁后可見不著色的夾膜。?

7.計數(shù)池用后，應(yīng)用75%乙醇消毒60min。忌用苯酚消毒，因有損計數(shù)池的刻度。