怎樣用高效液相色譜法計算檢出限和定量限
首先要采集一段基線，看一看波動情況，需要一段穩(wěn)定的波動，看看最高點和最低點之間的高度。這個就是你的儀器噪音。
然后是將你需要測定的樣品進樣分析，當信噪比為10的時候，這個濃度就是定量限；當信噪比為3的時候，這個濃度就是檢測限。信噪比的意思就是信號/噪音。
比如說，你的噪音高度大約是0.1mV，那么檢測限就是你的待測樣品逐級稀釋至 樣品峰高為0.3mV時樣品的濃度，定量限則是峰高為1.0mV時的樣品濃度。
你可以選擇線性最小濃度的樣品進樣，假設它的濃度是10ug/ml，進樣后主峰峰高是10mV，那么你的定量限濃度大約是這個濃度稀釋10倍，也就是1ug/ml。而檢測限濃度則需要這個濃度再稀釋3倍，大約是0.3ug/ml
高效液相色譜法（High Performance Liquid Chromatography \ HPLC）又稱“高壓液相色譜”、“高速液相色譜”、“高分離度液相色譜”、“近代柱色譜”等。高效液相色譜是色譜法的一個重要分支，以液體為流動相，采用高壓輸液系統(tǒng)，將具有不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑、緩沖液等流動相泵入裝有固定相的色譜柱，在柱內各成分被分離后，進入檢測器進行檢測，從而實現(xiàn)對試樣的分析。該方法已成為化學、醫(yī)學、工業(yè)、農學、商檢和法檢等學科領域中重要的分離分析技術應用[1]??。
高效液相色譜法有“四高一廣”的特點：
①高壓：流動相為液體，流經(jīng)色譜柱時，受到的阻力較大，為了能迅速通過色譜柱，必須對載液加高壓。
②高速：分析速度快、載液流速快，較經(jīng)典液體色譜法速度快得多，通常分析一個樣品在15～30分鐘，有些樣品甚至在5分鐘內即可完成，一般小于1小時。
③高效：分離效能高。可選擇固定相和流動相以達到最佳分離效果，比工業(yè)精餾塔和氣相色譜的分離效能高出許多倍。
④高靈敏度：紫外檢測器可達0.01ng，進樣量在μL數(shù)量級。
⑤應用范圍廣：百分之七十以上的有機化合物可用高效液相色譜分析，特別是高沸點、大分子、強極性、熱穩(wěn)定性差化合物的分離分析，顯示出優(yōu)勢。
⑥柱子可反復使用：用一根柱子可分離不同化合物
⑦樣品量少、容易回收：樣品經(jīng)過色譜柱后不被破壞，可以收集單一組分或做制備。
此外高效液相色譜還有色譜柱可反復使用、樣品不被破壞、易回收等優(yōu)點，但也有缺點，與氣相色譜相比各有所長，相互補充。高效液相色譜的缺點是有“柱外效應”。在從進樣到檢測器之間，除了柱子以外的任何死空間（進樣器、柱接頭、連接管和檢測池等）中，如果流動相的流型有變化，被分離物質的任何擴散和滯留都會顯著地導致色譜峰的加寬，柱效率降低。高效液相色譜檢測器的靈敏度不及氣相色譜。
