血細(xì)胞分析儀激光散射和細(xì)胞化學(xué)染色技術(shù)
激光散射和細(xì)胞化學(xué)染色技術(shù)
在白細(xì)胞分類上,儀器采用兩個通道進(jìn)行,一個為過氧化酶檢測通道,另一個為嗜堿細(xì)胞檢測通道。
過氧化酶反應(yīng)(peroxidase,POX)是血涂片染色的一個常用細(xì)胞化學(xué)染色方法,用于鑒別原始細(xì)胞與成熟的粒細(xì)胞,鑒別粒細(xì)胞與非粒細(xì)胞。染色后的細(xì)胞內(nèi)無藍(lán)黑色顆粒出現(xiàn)為陰性反應(yīng),出現(xiàn)細(xì)小顆?;蛳∈铇臃植嫉暮谏w粒為弱陽性反應(yīng),出現(xiàn)黑色粗大而密集的顆粒為強(qiáng)陽性反應(yīng)。過氧化物酶主要存在于粒細(xì)胞系和單核細(xì)胞系中,各類白細(xì)胞對過氧化物酶的反應(yīng)是這樣的:早期的原始粒細(xì)胞為陰性,早幼粒以后的各階段都含有過氧化物酶,并隨著細(xì)胞的成熟過氧化酶含量逐漸增強(qiáng),中性分葉核粒細(xì)胞會出現(xiàn)強(qiáng)陽性反應(yīng),嗜酸性粒細(xì)胞具有最強(qiáng)的過氧化物酶反應(yīng),嗜堿粒細(xì)胞不含此酶呈陰性反應(yīng)。在單核細(xì)胞系統(tǒng),除早期原始階段外,幼稚單核和單核細(xì)胞會出現(xiàn)較弱的過氧化物酶反應(yīng)。淋巴細(xì)胞、幼稚紅細(xì)胞、巨核細(xì)胞等都為過氧化物酶陰性反應(yīng)。過氧化酶檢測通道就是根據(jù)這個原理設(shè)計(jì)的,它檢測每一個通過流動計(jì)數(shù)池中的白細(xì)胞,經(jīng)過激光照射所產(chǎn)生的過氧化酶散射光吸收率,來當(dāng)然試劑和輔助試劑均進(jìn)行了改良。
1)過氧化酶最強(qiáng)陽性的嗜酸性粒細(xì)胞;
2)過氧化酶強(qiáng)陽性的嗜中性分葉核粒細(xì)胞;
3)體積較大、過氧化酶弱陽性的單核細(xì)胞;
4)體積較小、過氧化物酶陰性的淋巴細(xì)胞;
5)體積大于淋巴細(xì)胞且過氧化物酶陰性的未染色大細(xì)胞,此類細(xì)胞增加提示幼稚或原始的各類細(xì)胞可能出現(xiàn)。
在嗜堿細(xì)胞通道中采用的檢測原理是:專用的嗜堿細(xì)胞試劑將除了嗜堿細(xì)胞以外的白細(xì)胞除去細(xì)胞膜,使其裸核化并體積變小,僅將嗜堿性粒細(xì)胞保持原有狀態(tài),體積明顯大于其他類的白細(xì)胞。