氨基酸紙層析為什么會(huì)出現(xiàn)拖尾現(xiàn)象
究其原因，經(jīng)自己多次親手操作，多次反復(fù)對比，始悟出一些道理，敘述如下：拖尾現(xiàn)象是指展層，顯色后在層析分配圖上，所看到的某一種氨基酸的分子位移，不是如標(biāo)準(zhǔn)圖譜所示的那樣，完整地顯示在某一位置上，而是形成象笤帚似的那樣，前端粗圓而逐漸細(xì)小下來，宛如拖著一個(gè)尾巴。其圖所呈顏色也是由濃漸淡。其圖象的出現(xiàn)，原認(rèn)為是在實(shí)驗(yàn)中，對影響Rf值的主要因素要求，掌握不夠所致。諸如，物質(zhì)結(jié)構(gòu)與極性對Rf值的影響，層析溶劑對Rf值的影響，PH對Rf值的影響(溶劑、濾紙和樣品的PH值)，溫度對Rf值的影響，濾紙的質(zhì)地是否均勻，薄厚是否適當(dāng)，纖維的松緊度是否適中等對Rf值的影響，展層的方式(上行、下行)對Rf值的影響。然而在多次實(shí)驗(yàn)過程中無論怎佯嚴(yán)格遵循其影響Rf值的主要因素的要求，都仍不可避免地要出現(xiàn)拖尾現(xiàn)象。此時(shí)，這就需要從具體操作規(guī)范方面，諸如樣品的處理，點(diǎn)樣、展層、顯色等幾個(gè)操作程序去考慮思索，經(jīng)仔細(xì)分析，樣品的處理是為除去雜質(zhì)純化樣品，達(dá)到層析分配某氨基酸的情晰顯色圖像；展層過程是在上述影響Rf值的主要因素要求下
進(jìn)行，使樣品達(dá)到一個(gè)適當(dāng)?shù)奈灰?，便于在顯色后從圖象上，區(qū)分不同樣品的氨基酸；顯色是在用配制好的，與水不相混合，并揮發(fā)性較快的 邑劑噴霧后迅速吹干的。更何況顯色劑又是含水量極低，不會(huì)影響洋品的斑點(diǎn)擴(kuò)散，那么問題就集中在點(diǎn)樣這個(gè)操作程序上了。點(diǎn)樣是將被層析分配的幾種氨基酸混合液，和為了對照實(shí)驗(yàn)結(jié)果，而分別配制的幾種氨基酸的溶液，用微量點(diǎn)樣管或毛細(xì)管，或血球計(jì)數(shù)器將5一j5微升的樣品，點(diǎn)在以濾紙為惰性支持物的層析紙上設(shè)計(jì)好的多點(diǎn)位置中去。點(diǎn)樣后要自然風(fēng)干，或冷風(fēng)吹干。最好不要用加熱裝置，如吹風(fēng)機(jī)，燈泡之類的熱源將其樣品點(diǎn)加速干燥。因?yàn)榧訜嵫b置在學(xué)生操作時(shí)，一但注意不夠，掌握不好，則溫度升高勢必要使樣品破壞，更會(huì)使佯品點(diǎn)干的太燥。正是由于這樣，樣品點(diǎn)太干燥，使其樣品物的分子，牢固地吸牢在層析紙的纖維上。所以在展層過程中，樣品點(diǎn)的每個(gè)物質(zhì)分子，不能在層析紙上同時(shí)起步，而是形成了有先有后，魚貫而上行或下行的狀況，最終使洋品物質(zhì)的分子，不能同時(shí)都集中到達(dá)一個(gè)位置。致使在顯色后，實(shí)驗(yàn)結(jié)果的圖象上，觀察到的不是一個(gè)完整的斑點(diǎn)，而是一個(gè)拖著尾巴的斑點(diǎn)。這就是上述所說的拖尾現(xiàn)象。
鹵、結(jié)束語 ’
紙上分配層析所出現(xiàn)的拖尾現(xiàn)象，究其原因很簡單，就是在點(diǎn)樣品后，樣品點(diǎn)吹的太干燥所致。原因太簡單了，往往被人們?nèi)菀缀雎?，更引不起人們的重視。但它確實(shí)在困擾著人們的實(shí)驗(yàn)效果。為此，建議應(yīng)在該實(shí)驗(yàn)的點(diǎn)樣操作中，加上一句，“樣品點(diǎn)不要砍的太干燥，否則，樣品物質(zhì)的分子，會(huì)牢吸在層析紙的纖維上，出現(xiàn)拖尾現(xiàn)象”。
摘自：
1994年 3期《晉東南師專學(xué)報(bào)》：-67-67,95
關(guān)于對用“紙層析法分離鑒定氨基酸”實(shí)驗(yàn)中出現(xiàn)拖尾現(xiàn)象的分析
趙晉德
