1、簡(jiǎn)述

　　玉米赤霉烯酮（zearalenone，ZEN），又稱 F2 毒素，是由禾谷鐮刀菌、三線鐮刀菌、尖孢鐮刀菌、黃色鐮刀菌、串珠鐮刀菌、木賊鐮刀菌、燕麥鐮刀菌、雪腐鐮刀菌等菌種產(chǎn)生的有毒代謝產(chǎn)物，是一種雌激素真菌毒素?；瘜W(xué)名為6-（10-羥基-6-氧基-1-炭烯基）β-雷瑣酸-μ-內(nèi)脂，是一種白色的結(jié)晶，分子式為 C18H22O5，相對(duì)分子質(zhì)量為318；熔點(diǎn)為164～165℃；紫外線光譜最大吸收為236nm，274nm 和316nm；紅外線光譜最大吸收為970nm。純的玉米赤霉烯酮不溶于水、二硫化碳和四氯化碳，溶于堿性水溶液、乙醚、苯、氯仿、二氯甲烷、醋酸乙酯、乙腈和乙醇，微溶于石油醚（b.p.30～60℃），在紫外線照射下呈藍(lán)綠色。

　　玉米赤霉烯酮首先從赤霉病玉米中分離，有15種以上的衍生物，其主要存在于玉米和玉米制品中，小麥、大麥、高粱、大米中也有一定程度的分布，ZEN 主要污染玉米、麥類、谷物等。

　　玉米赤霉烯酮具有較強(qiáng)的生殖毒性和致畸作用，可引起動(dòng)物發(fā)生雌激素亢進(jìn)癥，導(dǎo)致動(dòng)物不孕或流產(chǎn)，對(duì)家禽特別是豬、牛和羊的影響較大，給畜牧業(yè)帶來經(jīng)濟(jì)損失。飼料中1mg/kg 的玉米赤霉烯酮就會(huì)使動(dòng)物產(chǎn)生雌性化，更高的濃度（50～100mg/kg）將會(huì)對(duì)懷孕、排卵、移植、胎兒的發(fā)育、新生動(dòng)物兒的生存力產(chǎn)生不利的影響。

　　目前玉米赤霉烯酮的測(cè)定方法有免疫親和柱熒光計(jì)法、薄層色譜法、氣相色譜法、高壓液相色譜法等。下面介紹的是免疫親和柱熒光計(jì)快速測(cè)定法。

　　2、免疫親和柱熒光計(jì)快速測(cè)定法

　?、僭噭┡c設(shè)備

　　（1）4-系列真菌毒素專用熒光計(jì)。

　　（2）均質(zhì)器（250mL）。

　?。?）微量移液器（1.0mL）。

　　（4）渦流混合器。

　?。?）玻璃纖微濾紙（1.0m）。

　　（6）VICAM 玉米赤霉烯酮親和柱。

　　（7）聚乙二醇（PEG），相對(duì)分子質(zhì)量8000。

　?。?）色譜級(jí)甲醇。

　?。?）色譜級(jí)乙腈。

　?。?0）氯化鈉。

　　（11）VICAM 玉米赤霉烯酮衍生液。

　　（12）VICAM 真菌毒素通用標(biāo)定標(biāo)準(zhǔn)物。

　　（13）0.1％吐溫-20/PBS 緩沖液。

　?、跇?biāo)定值的設(shè)置：

　　使用 VICAM 真菌毒素通用標(biāo)定標(biāo)準(zhǔn)物

　　儀器

　　綠色

　　紅色

　　黃色

　　Vicam4 系列真菌毒素專用分析儀

　　-0.05

　　0.45

　　0.20+/-0.03

　?、墼囼?yàn)準(zhǔn)備

　?。?）標(biāo)定熒光計(jì)。

　　（2）確認(rèn)延時(shí)時(shí)間為300s。

　?。?）配制1倍0.1％吐溫-20/PBS緩沖液（每月配制一次，或根據(jù)需要配制）。

　?。?）配制提取液：乙腈/水（90:10，體積比），或者甲醇/水（80:20，體積比）。

　?。?）試劑空白試驗(yàn)（1mL 甲醇＋1mL 顯色劑置于測(cè)試管中），熒光計(jì)讀數(shù)應(yīng)為0。

　?。?）空白試驗(yàn)（2mL 純水置于測(cè)試管中），熒光計(jì)讀數(shù)應(yīng)為0。

　　④樣品提取

　?。?）稱取20g 磨細(xì)的樣品，2g 氯化鈉，置于攪拌杯中。

　　（2）加入50mL 甲醇/水（80＋20）溶液，或者乙腈/水（90＋10）。

　　（3）蓋上攪拌杯的蓋子，高速攪拌2min。

　?。?）取下蓋子，將提取物倒入折疊式濾紙上，濾液收集于干凈的容器中。

　?、萏崛∥锏南♂?/p>

　?。?）移取10mL 上步的濾液，置于干凈的容器中。

　　（2）用40mL 1倍0.1％吐溫-20/PBS 緩沖液稀釋，混勻。

　?。?）將上步稀釋液通過玻璃微纖維濾紙（1.0μm）過濾，濾液收集于玻璃注射器筒中量取10mL。

　?、薹蛛x柱色譜操作與測(cè)定

　?。?）將上步10mL 濾液（10mL 相當(dāng)于0.8的樣品），以1～2滴/s 的流速全部通過 Zearala Test 親和柱，直至空氣進(jìn)入到親和柱中。

　?。?）將10mL 0.1％吐溫-20/PBS 緩沖液以1～2滴/s的流速通過親和柱。

　?。?）將10mL 純水以2滴/s的流速通過親和柱，直至空氣進(jìn)入到親和柱中。

　?。?）用1.00mL HPLC 級(jí)的甲醇以1滴/s的流速淋洗親和柱，將所有樣品淋洗液（1mL）收集于玻璃測(cè)試管中。

　　（5）將1.00mL ZearalaTest 顯色劑加到測(cè)試管的淋洗液中。混勻后，將測(cè)試管置于已標(biāo)定好了的熒光計(jì)中。300s 后，讀數(shù)。

　?。?）檢測(cè)限：0.10mg/kg，測(cè)定范圍0～5.0mg/kg。