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解決方案|東西分析氣相色譜-質(zhì)譜法測(cè)定尿中有機(jī)酸
前言
我們的身體無(wú)時(shí)無(wú)刻不在進(jìn)行著復(fù)雜的化學(xué)反應(yīng)（新陳代謝）。碳水化合物、脂肪、蛋白質(zhì)等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的分解與合成過(guò)程中，會(huì)產(chǎn)生大量中間體和終產(chǎn)物，其中很多屬于有機(jī)酸。這些有機(jī)酸分子量不大，溶解性好，最終會(huì)隨著尿液排出體外。因此，尿液有機(jī)酸的種類(lèi)和含量，就像一本實(shí)時(shí)記錄的“化學(xué)日記”，忠實(shí)反映了體內(nèi)多條關(guān)鍵代謝途徑的運(yùn)行狀態(tài)。它們是能量生成（如三羧酸循環(huán)）、氨基酸代謝、脂肪酸氧化、腸道菌群活動(dòng)甚至神經(jīng)遞質(zhì)代謝的直接或間接“見(jiàn)證者”。
要從成百上千種復(fù)雜成分的尿液中，準(zhǔn)確識(shí)別并定量這些微量的特定有機(jī)酸，絕非易事。東西分析GC-MS 3250型氣質(zhì)聯(lián)用儀配備高性能四極桿質(zhì)量分析器，能清晰分辨結(jié)構(gòu)相似化合物的細(xì)微差異，并檢測(cè)到極低濃度（常達(dá)?ng/mL?或?ppb?級(jí)）的有機(jī)酸，本文介紹了采用氣相色譜-質(zhì)譜法測(cè)定尿中有機(jī)酸的實(shí)驗(yàn)方法，建立了基于東西分析GC-MS 3250型氣質(zhì)聯(lián)用儀的測(cè)定方法，可供相關(guān)人員參考。
GC-MS 3250型氣質(zhì)聯(lián)用儀
GC-MS3250型氣質(zhì)聯(lián)用儀
有機(jī)酸標(biāo)樣，分析天平、渦旋混合器、離心機(jī)、氮吹儀、烘箱、冰箱
移液槍、精密PH試紙、容量瓶、具塞玻璃試管等。
儀器條件
色譜條件：
Equity-5（30m×0.25mm×0.25μm)石英毛細(xì)管柱，柱流量:1mL/min，分流進(jìn)樣，分流比：40:1，進(jìn)樣量：1uL，進(jìn)樣口：260℃，柱溫：80℃保持1min，然后以5℃/min升至270℃,保持2min。?
質(zhì)譜條件：
EI源，電子能量:70eV，離子源:200℃，接口:270℃，掃描方式：全掃描定性，掃描范圍：50u500u，溶劑峰時(shí)間：5min，電子倍增器高壓：700 V。
樣品前處理
取約20mL尿樣于50mL塑料離心試管中，置于離心機(jī)中離心約5min，移取2ml澄清尿樣于10mL的玻璃具塞試管中，加入50uL 4000mg/L的十七烷酸內(nèi)標(biāo)物， 加入1mL 5%鹽酸羥胺水溶液，渦旋混勻，室溫下進(jìn)行肟化反應(yīng)60min；肟化反應(yīng)完成后加入一定量的鹽酸調(diào)節(jié)PH值為1，加入約1g氯化鈉渦旋使水層飽和，加入3mL乙酸乙酯渦旋提取，提取兩次，靜置分層后將提取液合并于同一玻璃具塞試管中（共準(zhǔn)確移取出5mL提取液），然后于氮吹儀中50℃慢慢吹干，吹干后加入200uL衍生化試劑（BSTFA+TMCS 99:1），渦旋混合，然后放置于烘箱中于80℃衍生化反應(yīng)30min，反應(yīng)完成后將其轉(zhuǎn)移至2mL小樣品瓶中，然后取1uL進(jìn)GC-MS分析。
有機(jī)酸標(biāo)樣譜圖
有機(jī)酸衍生物定性結(jié)果
目標(biāo)化合物校準(zhǔn)曲線方程和線性相關(guān)系數(shù)
本實(shí)驗(yàn)成功建立了基于氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)（GC-MS） 的尿中有機(jī)酸高靈敏度檢測(cè)方法，依托東西分析GC-MS 3250型氣質(zhì)聯(lián)用儀的高性能四極桿質(zhì)量分析器，實(shí)現(xiàn)了對(duì)復(fù)雜生物樣本中痕量代謝標(biāo)志物的精準(zhǔn)定性與定量分析。其出色的線性關(guān)系（R2>0.997）與多代謝通路覆蓋性，使其在臨床診斷、代謝組學(xué)研究及新生兒篩查等領(lǐng)域具備重要應(yīng)用潛力，可供相關(guān)人員參考。
北京東西分析儀器有限公司，擁有三十多年的分析儀器研發(fā)、制造、服務(wù)的歷史，系國(guó)家高新技術(shù)企業(yè)、北京市高新技術(shù)企業(yè)、北京市“專精特新”小巨人企業(yè)、北京市“專精特新”中小企業(yè)和分析儀器制造行業(yè)國(guó)際化企業(yè)。擁有計(jì)量器具資質(zhì)、醫(yī)療器械資質(zhì)和安標(biāo)資質(zhì)等多項(xiàng)資質(zhì)證書(shū)。多次獲得BCEIA金獎(jiǎng)和行業(yè)最具影響力獎(jiǎng)。在行業(yè)內(nèi)率先通過(guò)ISO9001國(guó)際質(zhì)量體系認(rèn)證，ISO14001環(huán)境管理體系認(rèn)證。多個(gè)產(chǎn)品取得歐盟CE認(rèn)證，系中華預(yù)防醫(yī)學(xué)會(huì)衛(wèi)檢專用委員會(huì)產(chǎn)品信得過(guò)單位。
