薄層層析定量方法
可分為洗脫測(cè)定法、薄層層析法和原位掃描法：
洗脫測(cè)定法
①洗脫測(cè)定法，將展開(kāi)后的組分斑點(diǎn)處的吸附劑刮下，用適宜溶劑將組分洗脫溶出，然后用適當(dāng)方法進(jìn)行定量測(cè)定。常用方法為比色法、紫外－可見(jiàn)分光光度法，也可用電化學(xué)分析法等。
原位掃描法
②原位掃描法，將展開(kāi)后的薄層板放在光密度計(jì)內(nèi)，以一定波長(zhǎng)的光照射，同時(shí)使斑點(diǎn)移過(guò)光路，由于斑點(diǎn)對(duì)光的吸收，可繪出峰形曲線(xiàn)，由峰面積與標(biāo)準(zhǔn)樣品的吸收相比較而求出含量。
薄層層析法
薄層層析法以吸附層析使用最為普遍。常用的吸附劑為硅膠、氧化鋁等。薄層層析和其他層析法一樣，除吸附法外，也可進(jìn)行分配、離子交換、分子排阻等機(jī)理的層析，即將鋪制薄層的材料相應(yīng)換為涂以固定相的載體、離子交換劑、凝膠等，其操作與吸附法基本相同。
制板 鋪制薄層板時(shí)，要求基底板潔凈平整，可用干法或濕法鋪制?，F(xiàn)常用濕法制板，即將吸附劑和粘合劑（如燒石膏）按一定比例混合，加入適量水調(diào)勻，用涂布器將此勻漿緩慢地移過(guò)基底板，放置晾干，再經(jīng)適當(dāng)烘烤活化后即可使用。如不加粘合劑和水，直接將吸附劑均勻地鋪成薄層，則為干法制板?，F(xiàn)在市場(chǎng)上已有各種制好的薄層板出售，統(tǒng)稱(chēng)預(yù)制板。
展開(kāi) 有多種方式，以上行法最為常用。將薄層板垂直或傾斜放置，將展開(kāi)溶劑加于低部，使之自下向上移動(dòng)。下行法則為用濾紙將溶劑引至薄層上端，使其自上向下流動(dòng)。平行展開(kāi)時(shí)，將板平放，溶劑被吸上至薄層板點(diǎn)有樣品的一端,進(jìn)行展開(kāi)。使用圓形薄層板時(shí),將樣品點(diǎn)在圓心附近，使溶劑自圓心向圓周方向移動(dòng)，稱(chēng)為環(huán)形展開(kāi)或徑向展開(kāi)；將樣品點(diǎn)在圓周位置，使溶劑自圓周向圓心移動(dòng)的為向心展開(kāi)，適用于f值大的組分的分離。將點(diǎn)樣品處附近的吸附劑刮去，使溶劑只能通過(guò)樣品點(diǎn)附近的較窄部分前進(jìn)展開(kāi)，因而溶劑前緣呈弧形的展開(kāi)方式，也稱(chēng)徑向展開(kāi)，這種方式對(duì)較難分離的組分可能效果好些。
展開(kāi)一次后取出薄層板使溶劑揮發(fā)，再用同一溶劑或換用其他溶劑再次沿此方向展開(kāi)的稱(chēng)多次展開(kāi)。將樣品點(diǎn)在方形薄層板的一角，先沿著一個(gè)方向展開(kāi)，然后將板轉(zhuǎn)動(dòng)90°，再沿著另一方向展開(kāi)的為雙向展開(kāi)。多次展開(kāi)和雙向展開(kāi)都可加強(qiáng)分離效果。
特點(diǎn) 操作簡(jiǎn)便，設(shè)備簡(jiǎn)單，除光密度計(jì)外，不需特殊設(shè)備，分離效果較好，時(shí)間較短，一塊板上可同時(shí)分離許多樣品。除低沸點(diǎn)物質(zhì)外，各種無(wú)機(jī)和有機(jī)化合物都可進(jìn)行分離。
應(yīng)用和發(fā)展 廣泛應(yīng)用于石油、化工、醫(yī)藥、生化等方面。樣品用量一般為幾至幾百微克，是一種較實(shí)用、有效的微量分離分析方法。此法也可用于分離制備較大量的樣品，即使用較大較厚的薄層板，將樣品溶液在起始點(diǎn)處點(diǎn)成條帶狀，這樣可以分離毫克量樣品。
高效液相色譜法是用微細(xì)顆粒得到高效分離的辦法，也已用于薄層層析。使用5～10微米的吸附劑制板,可得較好的分離效果,為與一般的薄層層析法相區(qū)別,稱(chēng)為高效薄層層析。其優(yōu)點(diǎn)是樣品量少(只需納克量樣品)、展開(kāi)距離小、展開(kāi)時(shí)間短，是薄層層析法的一個(gè)重要發(fā)展。
