AWWA QTC98335
開(kāi)發(fā)基于 PCR 的熒光均相法檢測(cè)隱孢子蟲(chóng)的試劑盒

Development of a PCR-Based Kit for the Detection of Cryptosporidium parvum Using a Fluorescent Homogeneous Format

標(biāo)準(zhǔn)號(hào)

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發(fā)布

1970年

發(fā)布單位

SCC

當(dāng)前最新

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適用范圍

本文介紹了一種快速簡(jiǎn)便的聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng) (PCR) 檢測(cè)小隱孢子蟲(chóng)的方案。該方案使用片劑形式的 PCR 試劑和小隱孢子蟲(chóng)特有的 PCR 引物。使用 PCR 試劑片可減少制備 PCR 試劑混合物所需的時(shí)間和勞動(dòng)力，提高可重復(fù)性，并降低污染的可能性。每個(gè) PCR 檢測(cè)還包含一種熱穩(wěn)定性 DNA 插入熒光染料。PCR 產(chǎn)物的終點(diǎn)檢測(cè)是使用可容納 PCR 管的熒光計(jì)進(jìn)行的，提供封閉管檢測(cè)，無(wú)需對(duì) PCR 產(chǎn)物進(jìn)行凝膠電泳分析。由于無(wú)需打開(kāi)裝有完成反應(yīng)的管，因此實(shí)驗(yàn)室被 PCR 產(chǎn)物污染的可能性大大降低。目前，使用熒光計(jì)進(jìn)行終點(diǎn)檢測(cè)的檢測(cè)限為五個(gè)卵囊，使用純化的卵囊原液和通過(guò)凍融循環(huán)制備的模板 DNA。對(duì)于含有免疫磁分離 (IMS) 純化環(huán)境原水濃縮液（相當(dāng)于每個(gè) PCR 0.5 毫升填充顆粒）的接種 PCR 檢測(cè)，檢測(cè)限為 10 個(gè)卵囊。該試劑盒的未來(lái)開(kāi)發(fā)可能會(huì)結(jié)合基于熒光探針的技術(shù)來(lái)檢測(cè)特定 PCR 產(chǎn)物，從而可能檢測(cè)出單個(gè) C. parvum 卵囊。

專題

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