T/SHZSAQS 016-2020
綿羊雙肌表型主效基因mstn分子檢測(cè)技術(shù)規(guī)程
Technical regulations for molecular detection of the main effect gene mstn of sheep double muscle phenotype
技術(shù)規(guī)程核心解讀
本標(biāo)準(zhǔn)針對(duì)綿羊mstn基因3'UTR區(qū)G6223A突變建立的分子檢測(cè)體系，通過(guò)SSCP（單鏈構(gòu)象多態(tài)性）技術(shù)實(shí)現(xiàn)基因分型，為雙肌表型選育提供分子依據(jù)。
關(guān)鍵技術(shù)對(duì)比
| 檢測(cè)維度 | 傳統(tǒng)方法 | 本規(guī)程方法 |
|---|---|---|
| 靈敏度 | 需＞5%突變頻率 | 可檢測(cè)1%低頻突變 |
| 通量 | 單樣本檢測(cè) | 96孔板批量處理 |
| 成本 | 測(cè)序（￥150/樣） | 電泳檢測(cè)（￥20/樣） |
標(biāo)準(zhǔn)實(shí)施要點(diǎn)
樣本處理規(guī)范
采用ACD抗凝劑（檸檬酸:檸檬酸鈉:葡萄糖=0.48:1.32:1.47）保存血液樣本，防止DNA降解。實(shí)驗(yàn)證明該配比可使DNA提取效率提升23.7%。
關(guān)鍵試劑配制
- 30%丙烯酰胺需37℃溶解，避免高溫導(dǎo)致交聯(lián)劑分解
- 顯影液中甲醛濃度嚴(yán)格控制在2.5mL/500mL，過(guò)量會(huì)導(dǎo)致背景過(guò)深
技術(shù)演進(jìn)分析
該標(biāo)準(zhǔn)基于2002年Beltex綿羊突變發(fā)現(xiàn)，通過(guò)優(yōu)化：
- 退火溫度從52℃調(diào)整為50.5℃，提高引物結(jié)合特異性
- 銀染時(shí)間縮短至20分鐘，較傳統(tǒng)方法效率提升40%
- 建立三級(jí)判讀標(biāo)準(zhǔn)（GG/GA/AA），準(zhǔn)確率達(dá)99.2%
實(shí)施建議
質(zhì)量控制節(jié)點(diǎn)
| DNA純度 | OD260/280值＜1.7時(shí)需重新酚抽提 |
| 電泳條件 | 8%凝膠在150V恒壓電泳效果最佳 |
常見(jiàn)問(wèn)題處理
若SSCP出現(xiàn)額外條帶，可能原因：
1) 樣品變性不充分——確保98℃變性10min后立即冰浴
2) 凝膠聚合不均——TEMED加入后需在30min內(nèi)灌膠
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- 標(biāo)準(zhǔn)號(hào)
- T/SHZSAQS 016-2020
- 發(fā)布
- 2020年
- 總頁(yè)數(shù)
- 9頁(yè)
- 發(fā)布單位
- 中國(guó)團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)
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本規(guī)程規(guī)定了綿羊雙肌表型主效基因mstn的分子檢測(cè)方法。 本規(guī)程適用于綿羊雙肌表型主效基因mstn的分子檢測(cè)。