液相色譜法對(duì)白酒中安賽蜜和糖精鈉標(biāo)準(zhǔn)曲線建立的探討
摘要:建立了高效液相色譜對(duì)白酒中安賽蜜和糖精鈉標(biāo)準(zhǔn)曲線的方法，分析討論了影響檢測(cè)結(jié)果的因素。
關(guān)鍵詞：高效液相色譜法；標(biāo)準(zhǔn)曲線；白酒；安賽蜜；糖精鈉
中圖分類號(hào)：TS262.3；TS207.3 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：B
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白酒是我國(guó)傳統(tǒng)的蒸餾酒,歷史悠久,工藝獨(dú)特,馳名中外。近年來(lái)在我國(guó)白酒生產(chǎn)中為使白酒的口感更舒適,增加白酒的甜味，白酒產(chǎn)品中仍然存在違規(guī)使用甜味劑的情況。然而,我國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)禁止在發(fā)酵酒中添加甜味劑,因此，采用一種簡(jiǎn)便可靠的方法檢測(cè)甜味劑很有必要。白酒中添加的甜味劑主要有糖精鈉、安賽蜜(學(xué)名乙?；前匪徕?、甜蜜素(學(xué)名環(huán)己基氨基磺酸鈉)、阿斯巴甜等。
高效液相色譜以液體為流動(dòng)相，采用高壓輸液系統(tǒng)，將具有不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑、緩沖液等流動(dòng)相用高壓泵在進(jìn)樣器處與檢測(cè)樣品混合輸入裝有固定相的色譜柱，在柱內(nèi)各成分被分離后，進(jìn)入檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)樣品的分析檢測(cè)。該方法已成為化學(xué)、醫(yī)學(xué)、工業(yè)、農(nóng)學(xué)、商檢和法檢等學(xué)科領(lǐng)域中重要的分離分析技術(shù)。本文利用高效液相色譜法對(duì)白酒中的微量安賽蜜、糖精鈉甜味劑成分進(jìn)行了檢測(cè)，建立了在實(shí)驗(yàn)條件下安賽蜜和糖精鈉的標(biāo)準(zhǔn)曲線，并探討了影響檢測(cè)結(jié)果的因素。
1 材料與方法
1.1 儀器及試劑
高效液相色譜儀（北京普析通用儀器有限責(zé)任公司，型號(hào)：L6-P6,配有可變波長(zhǎng)紫外檢測(cè)器、色譜工作站、150×4.6mmSTC-C18 色譜柱、手動(dòng)進(jìn)樣器）。
恒溫水浴鍋（北京科偉儀器有限公司，型號(hào)：HH-S4 可控溫度精度：±0.5℃）。
分析天平（美國(guó)METTLER,型號(hào)：AE240,精度：萬(wàn)分之一克）。
安賽蜜標(biāo)準(zhǔn)品、糖精鈉標(biāo)準(zhǔn)品(0.25g,色譜純,德國(guó)Dr.Ehrenstorfer GMbH 生產(chǎn))。
甲醇（4L,色譜純,Honeywell公司生產(chǎn)）。
乙酸銨（500g，分析純，天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司）。
實(shí)驗(yàn)室一級(jí)水。
1.2 色譜條件
流動(dòng)相為0.02mol/L的乙酸銨-甲醇（90∶10），流速為1.0mL/min, 進(jìn)樣量為20μL，檢測(cè)波長(zhǎng)為230nm。
1.3 試劑的配制
用分析天平準(zhǔn)確稱量1.5416g 乙酸銨用水定容于1000mL容量瓶，配制成0.02mol/L的乙酸銨溶液。
利用配制好的1000mg/L 的安賽蜜和糖精鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液，稀釋分別配制成0.1mg/L、0.2mg/L、0.3mg/L、0.4mg/L、0.5mg/L、0.8mg/L、1.6mg/L的標(biāo)準(zhǔn)濃度。
1.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立
提前做好檢測(cè)前的樣品和標(biāo)準(zhǔn)溶液的準(zhǔn)備工作，利用選定的色譜檢測(cè)條件，對(duì)標(biāo)準(zhǔn)樣品進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)數(shù)據(jù)用LCWin 液相色譜工作站v1.0 中的數(shù)據(jù)處理功能進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和計(jì)算。標(biāo)準(zhǔn)曲線圖是以濃度為縱坐標(biāo)，峰面積為橫坐標(biāo)。
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2 結(jié)果與討論
2.1 流動(dòng)相的選擇
由圖3 和圖4 比較可以看出，在其他檢測(cè)條件不變的情況下，流動(dòng)相甲醇在10%時(shí)安賽蜜出峰時(shí)間為3.60min，糖精鈉出峰時(shí)間為6.78min。甲醇在5%時(shí)安賽蜜出峰時(shí)間為5.28min，糖精鈉出峰時(shí)間為12.5min。由此判斷甲醇含量增加，出峰時(shí)間相應(yīng)提前，有利于縮短檢測(cè)時(shí)間。
2.2 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇
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可變波長(zhǎng)紫外檢測(cè)器是具有高品質(zhì)光學(xué)性能的紫外-可見(jiàn)波長(zhǎng)檢測(cè)器，其可以與多種HPLC 系統(tǒng)配置兼容，可選波長(zhǎng)范圍為190~800nm。每種物質(zhì)都有特定的吸收波長(zhǎng)，在分析過(guò)程中，我們采用時(shí)間- 波長(zhǎng)程序進(jìn)行檢測(cè)，并對(duì)樣品進(jìn)行掃描，掃描的結(jié)果顯示安賽蜜和糖精鈉的最大吸收波長(zhǎng)在221nm 和217nm 處，這次實(shí)驗(yàn)選用220nm 進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果如圖五所示，經(jīng)過(guò)和圖三、圖四的比較發(fā)現(xiàn)在220nm下，峰高超過(guò)20mAU，采用國(guó)標(biāo)在230nm 下檢測(cè)峰高也能達(dá)到17mAU，兩者相差不大。
2.3 精密度及檢出下限
按照選定的色譜檢測(cè)條件，進(jìn)行了15 次的平行樣檢測(cè)，被測(cè)的樣品溶液加標(biāo)回收率安賽蜜為97.5%，糖精鈉為103%，安賽蜜的RSD 為2.78%，糖精鈉的RSD 為1.26%。測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確，數(shù)據(jù)可信。選用不含安賽蜜和糖精鈉的白酒樣品，添加安賽蜜和糖精鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行檢測(cè)，在檢測(cè)圖譜中，根據(jù)3倍噪音所對(duì)應(yīng)的濃度值分別計(jì)算出安賽蜜和糖精鈉的檢測(cè)下限為0.05mg/L和0.08mg/L。
3 結(jié)論
建立了高效液相色譜測(cè)定安賽蜜和糖精鈉的方法，并對(duì)影響結(jié)果的流動(dòng)相比例和檢測(cè)波長(zhǎng)進(jìn)行了分析。該方法安賽蜜的線性回歸方程y=1.4779e-005x-4.4547e-002（mg/L），相關(guān)系數(shù)r=0.9961，糖精鈉的線性回歸方程y=2.3435e-005x-3.1272e-003（mg/L），相關(guān)系數(shù)r=0.9973，從回收率和RSD、檢出限可以看出，該方法操作簡(jiǎn)便，檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確可靠。檢
測(cè)下限高的原因與檢測(cè)器的靈敏度和檢測(cè)方法有關(guān)，下一步需提高安賽蜜和糖精鈉的檢測(cè)下限。
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