流式細(xì)胞術(shù)怎么調(diào)節(jié)熒光補(bǔ)償FITC/PE/PerCP/APC
現(xiàn)在的機(jī)器都是自動調(diào)節(jié)，不過也要做好準(zhǔn)備工作。我大致說一下原理。
做補(bǔ)償調(diào)節(jié)，需要以下的樣本，無任何染色的樣本，分別是FITC， PE， PerCP還有APC單染陽性的樣本，所以你這里需要一共5個管子。
在純手工的年代，你需要畫出這四個顏色兩兩配對的散點(diǎn)圖，比如FITC-PE， FITC-PerCP， FITC-APC， PE-PerCP，PE-APC， PerCP-APC，這一共6個散點(diǎn)圖。
然后，先上未染色的樣本，調(diào)節(jié)各個熒光通道的電壓，是細(xì)胞都位于各個散點(diǎn)圖的左下角。
在記錄前，把每個樣本都先跑一邊，目的是觀察電壓的設(shè)置是否正確。比如FITC和PE會有重疊，上FITC陽性管的時候，雖然其他通道會有些信號，但FITC通道的信號應(yīng)該最強(qiáng)。如果發(fā)生了其他通道信號強(qiáng)于目的通道的情況，就要進(jìn)一步調(diào)節(jié)電壓，是目的通道的信號最強(qiáng)。這樣把每一個單染的樣本都過一遍，確保目的通道的信號最強(qiáng)。
現(xiàn)在的儀器軟件，不需要你自己畫這些散點(diǎn)圖，但是調(diào)劑電壓的這一步是必須的，可以在陰性對照管的頁面下完成。
電壓調(diào)節(jié)好以后，記錄陰性對照和陽性單染樣本的信號，然后機(jī)器會自動結(jié)算補(bǔ)償值。
如果你要手工計算，這里是原則：
以FITC-PE為例。在散點(diǎn)圖上，劃分為四個象限。如果縱坐標(biāo)是FITC， 橫坐標(biāo)是PE。調(diào)節(jié)電壓后，陰性的細(xì)胞位于左下象限。這是可以得出陰性細(xì)胞橫坐標(biāo)（PE）和縱坐標(biāo)（FITC）的平均熒光強(qiáng)度值。電壓調(diào)好以后，上單色陽性樣本。比如上牌FITC陽性，這時不要再改變電壓了，而是調(diào)節(jié)補(bǔ)償系數(shù)，最終目的就是讓FITC陽性的細(xì)胞都位于向下象限，并且該細(xì)胞團(tuán)的縱坐標(biāo)（PE）熒光強(qiáng)度和陰性細(xì)胞團(tuán)的值一致。其他顏色的兩兩補(bǔ)償以此類推。
