GB/T 36820-2018
甘蔗條紋花葉病毒實時熒光反轉錄聚合酶鏈式反應（RT-PCR）檢測方法
Detection method of Sugarcane streak mosaic virus by real-time reverse transcription polymerase chain reaction（RT-PCR）
GBT36820-2018, GB36820-2018
甘蔗條紋花葉病毒實時熒光反轉錄聚合酶鏈式反應檢測方法
1. 標準制定背景與意義
甘蔗條紋花葉病毒（Sugarcane streak mosaic virus, SCSMV）是一種嚴重影響甘蔗生產的檢疫性病害。該標準的制定旨在為快速、準確檢測甘蔗中的SCSMV提供科學依據(jù)，保障甘蔗產業(yè)的健康發(fā)展。本標準由全國植物檢疫標準化技術委員會提出并歸口管理，主要起草單位包括福建農林大學國家甘蔗工程技術研究中心等。
2. 方法原理
基于SCSMV病毒CP基因序列設計特異性引物和探針，利用反轉錄酶將病毒RNA轉化為cDNA，并在同一反應管內進行實時熒光PCR擴增。通過TaqMan探針的熒光信號變化監(jiān)測目標序列的存在，實現(xiàn)快速檢測。
3. 標準框架對比分析
| 標準維度 | GB/T 36820—2018 | 對比說明 |
|---|---|---|
| 檢測原理 | 實時熒光RT-PCR結合TaqMan探針技術 | 相較于傳統(tǒng)ELISA方法，靈敏度和特異性顯著提高 |
| 檢測范圍 | 適用于甘蔗活體寄主植物的快速檢測 | 專為甘蔗檢疫設計，針對性強 |
| 儀器要求 | 實時熒光PCR儀（激發(fā)/檢測波長范圍：350nm~750nm） | 設備性能指標嚴格，確保數(shù)據(jù)準確性 |
4. 實施建議
實際應用中的注意事項
樣品采集與前處理：確保工具滅菌，避免交叉污染。葉片和蔗莖樣本需分別處理，并在2~8℃條件下短期保存或-80℃長期保存。
試劑配制：嚴格遵循無核酸酶水配制原則，PCR反應液需現(xiàn)用現(xiàn)配，避免反復凍融影響效果。
數(shù)據(jù)分析：Ct值是關鍵指標（陽性：Ct≤35；陰性：Ct≥40），需結合擴增曲線進行綜合判斷。
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- 標準號
- GB/T 36820-2018
- 別名
- GBT36820-2018
GB36820-2018 - 發(fā)布
- 2018年
- 總頁數(shù)
- 9頁
- 發(fā)布單位
- 國家質檢總局
- 當前最新
- GB/T 36820-2018
本標準規(guī)定了甘蔗條紋花葉病毒（Sugarcane streakmosaicvirus）實時熒光反轉錄聚合酶鏈式反應(RT-PCR)檢測方法的儀器與設備、試劑與材料、樣品的采集與前處理、檢測以及結果判斷與表述等。本標準適用于可能帶有甘蔗條紋花葉病毒的活體寄主植物的快速檢測、診斷。
GB/T 36820-2018 中提到的儀器設備
| 實時熒光PCR檢測儀 激發(fā)/檢測波長范圍 350 nm~750 nm, 升降溫速度 ≥2.0 °C/s | 用于實時監(jiān)測熒光信號以判斷目標序列擴增情況。 |
| 核酸蛋白分析儀或紫外分光光度計 適用于RNA濃度測定 | 用于測量RNA的吸光值，評估其純度和濃度。 |