GB/T 36820-2018
甘蔗條紋花葉病毒實(shí)時(shí)熒光反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（RT-PCR）檢測(cè)方法
Detection method of Sugarcane streak mosaic virus by real-time reverse transcription polymerase chain reaction（RT-PCR）
GBT36820-2018, GB36820-2018
1. 檢測(cè)原理
基于SCSMV病毒CP基因保守序列設(shè)計(jì)特異性引物和TaqMan探針，通過(guò)實(shí)時(shí)熒光信號(hào)變化判定病毒存在。
2. 儀器與試劑
| 設(shè)備類型 | 規(guī)格要求 |
|---|---|
| 實(shí)時(shí)熒光PCR儀 | 升降溫速度≥2.0°C/s，支持FAM/TAMRA熒光通道 |
| 高速離心機(jī) | ≥12,000g，配1.5/2.0mL轉(zhuǎn)子 |
| 微量加樣器 | 0.1μL-1000μL量程范圍 |
關(guān)鍵試劑：
- 裂解液（含異硫氰酸胍/苯酚）
- Ex Taq HS DNA聚合酶
- FAM標(biāo)記探針：5'-FAM-TGCTGC...-TAMRA-3'
3. 標(biāo)準(zhǔn)操作流程
3.1 樣本處理
- 取-1葉葉片或蔗莖汁液，液氮速凍
- 研磨后加入1mL裂解液，氯仿-異丙醇法提取RNA
- 用核酸蛋白分析儀檢測(cè)A260/A280比值（合格范圍1.8-2.0）
3.2 RT-PCR反應(yīng)
| 參數(shù) | 設(shè)置條件 |
|---|---|
| 反轉(zhuǎn)錄 | 42°C 5min→95°C 10s |
| 擴(kuò)增程序 | 95°C 10s→60°C 34s，40循環(huán) |
| 反應(yīng)體系 | 20μL（含2μL模板RNA） |
4. 結(jié)果判讀
陽(yáng)性判定：
- Ct值≤35.0且出現(xiàn)S型擴(kuò)增曲線
- 陽(yáng)性對(duì)照Ct≤30.0
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- 標(biāo)準(zhǔn)號(hào)
- GB/T 36820-2018
- 別名
- GBT36820-2018
GB36820-2018 - 發(fā)布
- 2018年
- 總頁(yè)數(shù)
- 9頁(yè)
- 發(fā)布單位
- 國(guó)家市場(chǎng)監(jiān)督管理總局、中國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)
- 當(dāng)前最新
- GB/T 36820-2018
本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了甘蔗條紋花葉病毒（Sugarcane streakmosaicvirus）實(shí)時(shí)熒光反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)檢測(cè)方法的儀器與設(shè)備、試劑與材料、樣品的采集與前處理、檢測(cè)以及結(jié)果判斷與表述等。本標(biāo)準(zhǔn)適用于可能帶有甘蔗條紋花葉病毒的活體寄主植物的快速檢測(cè)、診斷。
GB/T 36820-2018 中提到的儀器設(shè)備
| 實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)儀 激發(fā)/檢測(cè)波長(zhǎng)范圍 350 nm~750 nm, 升降溫速度 ≥2.0 °C/s | 用于實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)熒光信號(hào)以判斷目標(biāo)序列擴(kuò)增情況。 |
| 核酸蛋白分析儀或紫外分光光度計(jì) 適用于RNA濃度測(cè)定 | 用于測(cè)量RNA的吸光值，評(píng)估其純度和濃度。 |