什么叫QPCR
QPCR 問：什么是QPCR？答：QPCR的英文全名是Real-time Quantitative PCR Detecting System。即實時熒光定量核酸擴增檢測系統(tǒng)，也叫實時定量基因擴增熒光檢測系統(tǒng)，簡稱QPCR。問：QPCR、DNA檢測、PCR之間的關(guān)系？答：聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（Polymerase Chain Reaction簡稱PCR）原理憑借敏感、特異、快速的特點榮獲93年諾貝爾化學(xué)獎。因其在病原體檢測方面的獨特優(yōu)勢，因而發(fā)達(dá)國家在相關(guān)方法和儀器方面的研發(fā)非常快，成為分子生物學(xué)診斷的主流，至今仍處于學(xué)術(shù)和應(yīng)用前沿：第一代產(chǎn)品：基因擴增熱循環(huán)儀（DNA Thermal Cycler）+電泳儀+紫外分析儀+定性試劑，構(gòu)成PCR定性檢測。第二代產(chǎn)品：基因擴增熱循環(huán)儀+熒光儀+終點定量試劑，構(gòu)成PCR-DNA終點法定量檢測（End-point quantitative PCR detection），又分為終點酶免定量（ End-point ELISA-PCR）和終點熒光定量（End-point Fluor-PCR）兩種。第三代產(chǎn)品：實時定量QPCR儀＋實時熒光定量試劑，構(gòu)成QPCR-DAN/RNA實時熒光定量檢測。問：相比以前的方法，QPCR有哪些特點？答：QPCR至少有以下特點：所用儀器少，只用一臺儀器。檢測時間短，只須45分鐘～1小時10分鐘（試劑各異），而定性PCR須3～4小時，酶免終點定量須6～8小時，熒光終點定量須2～3小時。操作極其簡單：前處理后，樣本插入儀器一小時后到電腦上來出報告即可，無須開蓋，移樣本（以前方法），避免污染。結(jié)果精確：定性PCR只能定性，很粗略，終點定量PCR由于只能在40個熱循環(huán)結(jié)束后檢測熒光，被測熒光達(dá)到飽和導(dǎo)致定量不夠精確，屬于半定量狀態(tài)。而實時熒光QPCR是在擴增的每時每刻連續(xù)檢測各樣本的熒光值的變化，如圖一所示： 圖一 西安天隆TL988實際曲線1檢測動態(tài)范圍：10～10000000000 DNA copies/ml檢測精度：0.1RLU辨別率：5000和10,000個模板拷貝樣本的辨別率99.7％。問：QPCR的技術(shù)先進(jìn)性、價格及應(yīng)用現(xiàn)狀？答：實時熒光QPCR是當(dāng)今世界用于臨床的最先進(jìn)核酸分子診斷技術(shù)，被美國FDA承認(rèn)并推崇，被美國FDA批準(zhǔn)并取得臨床應(yīng)用執(zhí)照的QPCR試劑品種有：HBV乙肝病毒DNA，HCV丙肝病毒RNA，HIV艾滋病病毒RNA，Chlamydi trachomatis（CT），性傳播疾病，沙眼衣原體，Neiserria gonorrhea(NG)，性傳播疾病，淋病雙球菌，Cytomegalovirus（CMV），性傳播疾病，巨細(xì)胞病毒，Mybobacterium tuberculosis（Mtb），呼吸道疾病，結(jié)核分支桿菌等。實時熒光PCR儀研發(fā)技術(shù)難度大，門檻高，發(fā)達(dá)國家也只有有限幾家知名公司生產(chǎn)，且售價昂貴：如美國ABI/7700-120萬元，美國ABI/5700-50萬元，瑞士Roche/Lightcycler-70萬元，美國Stratagene公司2005年新品MX3005P-80萬元 可見，在病人看來，哪家醫(yī)院應(yīng)用了QPCR技術(shù)便是先進(jìn)診斷技術(shù)的象征，在發(fā)達(dá)國家也是如此。 國產(chǎn)儀器情況：國產(chǎn)儀器生產(chǎn)單位不超過五家，其中包括：日本獨資杭州博日實時熒光QPCR儀（33孔）西安天隆科技有限公司TL988實時熒光QPCR儀（48孔） 以上產(chǎn)品均取得國家SFDA認(rèn)證，報價均在45萬以上。 國產(chǎn)試劑情況：多家公司生產(chǎn)實時熒光QPCR試劑盒，價格與終點法試劑相當(dāng)，且品種齊全，價格便宜，購買方便：乙肝HBV-DNA，丙肝HCV-RNA，艾滋AIDSHIV-RNA，性病系列：淋病雙球菌NG、沙眼衣原體CT、解脲支原體UU、皰疹病毒HSV、人體乳頭瘤HPV，優(yōu)生優(yōu)育系列：巨細(xì)胞病毒CMV、弓形蟲COX等。 編輯詞條 開放分類：病毒、DNA、PCR、分子生物、實時熒光定量PCR儀 參考資料： 1.?http://hi.baidu.com/pcr%D2%C7?2.?http://www.medtl.com?貢獻(xiàn)者：zhang120jing、弦之月NONO
