qpcr原理及應(yīng)用是什么
一、原理
在指數(shù)階段，PCR 產(chǎn)物的量在每個循環(huán)中大約增加一倍。然而，隨著反應(yīng)的進(jìn)行，反應(yīng)組分被消耗，最終一種或多種組分變得有限。此時，反應(yīng)減慢并進(jìn)入平臺期。
最初，熒光保持在背景水平，即使產(chǎn)物以指數(shù)方式累積，也無法檢測到熒光的增加。最終，足夠的擴(kuò)增產(chǎn)物積累以產(chǎn)生可檢測的熒光信號。
發(fā)生這種情況的循環(huán)數(shù)稱為量化循環(huán)，或 q。由于 q值是在試劑不受限制的指數(shù)階段測量的，因此可以使用實時 qPCR 根據(jù)描述反應(yīng)進(jìn)程的已知指數(shù)函數(shù)可靠和準(zhǔn)確地計算反應(yīng)中存在的模板的初始量。
反應(yīng)的 Cq主要由擴(kuò)增反應(yīng)開始時存在的模板量決定。如果在反應(yīng)開始時存在大量模板，則需要相對較少的擴(kuò)增循環(huán)來積累足夠的產(chǎn)物以產(chǎn)生高于背景的熒光信號。因此，反應(yīng)將具有低的或早期的 Cq。
二、應(yīng)用
實時熒光定量 PCR/qPCR 檢測已成為快速、靈敏地測定和定量各種生物樣品中核酸的首選工具，具有多種應(yīng)用，例如基因表達(dá)分析、食品中轉(zhuǎn)基因生物的檢測和癌癥表型分析.
在研究實驗室中，qPCR 測定廣泛用于定量測量轉(zhuǎn)化細(xì)胞系中的基因拷貝數(shù)（基因劑量）或突變基因的存在。與逆轉(zhuǎn)錄 PCR (RT-PCR) 相結(jié)合，qPCR 分析可用于精確定量基因表達(dá)的變化，例如，通過測量細(xì)胞的變化，響應(yīng)不同環(huán)境條件或藥物治療的表達(dá)增加或減少mRNA水平。
qPCR/實時 PCR 儀器
實時 PCR 檢測系統(tǒng)由配備光學(xué)檢測模塊的熱循環(huán)儀組成，用于測量每個擴(kuò)增循環(huán)期間熒光團(tuán)與目標(biāo)序列結(jié)合時產(chǎn)生的熒光信號。
Bio-Rad 實時 PCR 檢測系統(tǒng)具有熱循環(huán)儀和可互換的模塊，用于熒光團(tuán)的單重和多重檢測以及固定的實時 PCR 單元。所有 qPCR 系統(tǒng)都具有熱梯度功能。
