如何對qPCR數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析
如果避免了預(yù)擴(kuò)增，數(shù)據(jù)可轉(zhuǎn)換成絕對的cDNA數(shù)量，否則數(shù)據(jù)分析可以Cq值來開展，因為每個細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄本水平呈對數(shù)正態(tài)分布。一開始，可以各種方法對數(shù)據(jù)作圖，此外，基本的統(tǒng)計分析也應(yīng)開展（如陽性細(xì)胞的數(shù)量、平均值和偏差）。細(xì)胞數(shù)量測定通常是以驗證過的參考基因來均一化的。這種策略在單細(xì)胞分析中應(yīng)避免，因為單個細(xì)胞中的所有轉(zhuǎn)錄本水平隨時間變化。我們發(fā)現(xiàn)，校正分析和無監(jiān)督算法（如Kohonen self-organizing maps）對定義亞群和基因網(wǎng)絡(luò)很有用。Finn-Arne Weltzien（挪威獸醫(yī)學(xué)院） 我們在利用單細(xì)胞qPCR進(jìn)行定量測定時很小心。我們通常只進(jìn)行定性分析。如果我們定量，我們會利用目的基因的拷貝數(shù)相對參考基因的拷貝數(shù)。Weiwen Zhang（亞利桑那州立大學(xué)，現(xiàn)在天津大學(xué)） 對于每個單細(xì)胞，我們對目的基因和參考基因進(jìn)行qPCR分析，如原核生物的16s rRNA和真核生物的28s或actin。不過，我們也注意到，這些常用參考基因的表達(dá)水平在單細(xì)胞中也差別很大，對大量細(xì)胞qPCR的標(biāo)準(zhǔn)定量法則也須特別謹(jǐn)慎。在大部分情況下，我們報告原始和均一化的Ct值，并使用它們進(jìn)行單細(xì)胞qPCR結(jié)果的定量。Q6：您分析時使用哪些生物信息學(xué)工具？Mikael Kubista（TATAA生物中心）
